[發明專利]一種測定SDS敏感蛋白酶活力的酶譜方法

有效

• 申請號: 201110052625.9
• 申請日: 2011-03-07
• 公開（公告）號: CN102181515A
• 公開（公告）日: 2011-09-14
• 發明（設計）人: 王一明;朱泓;林先貴
• 申請（專利權）人: 中國科學院南京土壤研究所
• 主分類號: C12Q1/37
• 分類號: C12Q1/37;G01N27/447
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

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技術領域

本發明屬于生物蛋白酶檢測技術領域，具體涉及一種測定SDS敏感蛋白酶活力的酶譜方法。

背景技術

酶譜法（zymography）是一種在SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）技術的基礎上通過特異性底物和丙烯酰胺共聚合來測定酶活性的電泳檢測技術。明膠酶譜法是測定蛋白酶活性的一種常用手段，因該技術能測定多種降解明膠的蛋白酶活性，且具有方法簡單、檢測結果直觀和定量等優點，近年來被廣泛應用于生物蛋白酶檢測技術領域。

然而，大量的檢測數據顯示該方法仍存在一些缺點。如：1、缺乏一種能夠適用于多數蛋白酶的通用方法。2、缺乏特異性更高且能和丙烯酰胺偶聯的底物。3、難以測定一些SDS敏感蛋白酶的活性。4、難以測定一些含堿性蛋白酶的組分的活性。

相關文獻:

相關的美國專利包括：7，153，660?B2，?US2003/0171271?A1。相關日本專利包括：JP20010023781，?JP20010131，?JP20040299951，?JP20041014。相關文獻包括：?Choi?NS?et?al.，?2006，?J.?Microbiol.?Biotechnol.?16:457-464;?Boonyaras?Kim?SH?and?Choi?NS，?2000，?Biosci.，?Biotechnol.，?Biochem.?64:1722-1725;?Cristiane?M.C.?de?Salles?et?al.，?2006，?Anal.?Biochem.?357:153-155;?Christa?Heussen?and?Eugene?B.?Dowdle，?1980，?Anal.?Biochem.?102:196-202;?Eiichi?Saitoh?et?al.，?2007，?Anal.?Chem.?Insights?2:51-59;?Choi?NS?and?Kim?SH，?2000，?Anal.?Biochem.?281(2):236-8;?Choi?NS?et?al.，?2005，?J.?Microbiol.?Biotechnol.?15:35-39;?Jeff?Wilkesman?and?Liliana?Kurz，?2009，?Recent?Pat.?Biotechnol.?3:175-184;?Choi?NS?et?al.，?2009，?Anal.?Biochem.?386:121-122;?Choi?NS?et?al.，?2001，?J.?Biochem.?Mol.?Biol.?34:531-536;Choi?NS?et?al.，?2003，?J.?Biochem.?Mol.?Biol.?37:298-303;?PA?Snoek-van?Beurden?and?JW?Von?den?Hoff，?2005，?BIOTECHNIQUES??38:73-83;?Choi?NS?et?al.，?2005，?J.?Microbiol.?Biotechnol.?15:537-543;?R.?Porcel?et?al.，?2001，?J.?Colloid?Interface?Sci.?239:568-576;?A?Granelli-Piperno?and?E?Reich，?1978，?J.?Exp.?Med.;?TM?Leber?and?FR?Balkwill，?1997，?249:24-28;?騫愛榮等，?2003，?解放軍醫學雜志，?28：282-283;?姜微波等，?2002，?植物學通報，?19:607-610。

發明內容

技術問題：本發明的目的在于解決酶譜測定時SDS敏感酶活性難以檢測的問題，提供了一種用來測定SDS敏感蛋白酶的明膠酶譜方法。