[發明專利]一種新的氧肟酸類嗜鐵素的制備方法

無效

• 申請號: 201110052619.3
• 申請日: 2011-03-03
• 公開（公告）號: CN102181499A
• 公開（公告）日: 2011-09-14
• 發明（設計）人: 梁建根;陶榮祥;施躍峰;郝中娜;王連平;陳建忠;陳識峰;竺利紅;吳吉安
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C12P13/02
• 分類號: C12P13/02;A01N37/26;A01P3/00;C12R1/40
• 代理公司: 杭州賽科專利代理事務所 33230
• 代理人: 陳輝

1.一種異羥肟酸類型嗜鐵素化合物的制備方法，包括：

(1)、發酵液體的準備：菌種惡臭假單胞菌在固體KMB培養基上活化24h后，挑取單菌落接入5mL液體KMB培養基中，置于搖床中，28℃，150r/分鐘條件下培養24h，然后接種到固體種子培養基KMB中，在28℃下培養24h，得到一級種子；然后將培養好的一級種子挑取一環，在MKB培養基中發酵，其中1000毫升的KMB固體或液體培養基的成分包括：酪蛋白氨基酸5g，MgSO₄·7H₂O?2.5g，K₂HPO₄·3H₂O?2.5g，Fe³⁺的含量為0.1mg/L；

(2)、收集步驟(1)中發酵液1000mL旋轉蒸發(43℃)濃縮成稍粘稠液體，離心去除白色不溶物，上清液用HCl將pH調至4備用；

(3)、把步驟(2)中得到的上清液樣品上到大孔吸附樹脂柱后液體濃縮后用CAS檢測液檢查，不顯示活性，再用不同極性的洗脫液依次洗脫，對洗脫液進行減壓濃縮后，測定活性，其中不同極性的依次洗脫的洗脫液為：離子水、0.2％鹽酸溶液、10％甲醇-水溶液、30％甲醇-水溶液、50％甲醇-水溶液、80％甲醇-水溶液、100％甲醇、100％丙酮溶液。

2.根據權利要求1的方法，其中獲得的異羥肟酸類型嗜鐵素化合物的結構如下：

3.根據權利要求1的方法，其中將步驟(3)中洗脫的樣品再用HPLC分離，分離的條件為：材料ODS-BP；流速：1ml/分鐘；流動相：30％甲醇-水溶液洗脫30分鐘。

4.根據權利要求3的方法，其中HPLC分離的條件為：材料為ODS-BP；流速為1ml/分鐘；流動相為5-60％甲醇-水進行梯度洗脫30分鐘。

5.根據權利要求1-4之一所述的方法，其中在步驟(1)之后還對發酵液順次進行如下檢測：(1)CAS測試液檢測，呈明顯橙紅色，則證明發酵液中富含有嗜鐵素；(2)進行Arnow?Assay試驗，如果分析結果溶液顯黃色則認為初步確定發酵液可能含氧肟酸類型嗜鐵素。