[發明專利]生物體樣品基質輔助激光解吸離子化-傅立葉變換離子回旋共振質譜分析方法

無效

• 申請號: 201110047082.1
• 申請日: 2011-02-25
• 公開（公告）號: CN102175750A
• 公開（公告）日: 2011-09-07
• 發明（設計）人: 郭寅龍;汪航;張立;張菁;王昊陽;劉素紅
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海有機化學研究所
• 主分類號: G01N27/62
• 分類號: G01N27/62;G01N1/28;C07D213/20;C07J3/00;C07J7/00;C07J9/00;C07J1/00
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技術領域

本發明涉及一種生物體樣品基質輔助激光解吸離子化-傅立葉變換離子回旋共振質譜發現方法，進一步說是一種N-烷基吡啶同位素衍生化方法結合基質輔助激光解吸離子化-傅立葉變換離子回旋共振質譜(MALDI-FTMS)分析用于定性或定量分析生物體毛發和尿樣中醇類化合物和α，β-不飽和酮類化合物的方法，是一種快速、高效、靈敏的發現方法，為進一步確定該類化合物在體內含量變化與生理功能、疾病的關系奠定基礎。

技術背景

醇類和α，β-不飽和酮類化合物如膽固醇，脂肪醇，維生素A，類固醇激素等是人體內重要的代謝物，與多種代謝酶的功能相關。這些化合物的含量變化可以反應疾病和人體內代謝酶的異常，例如，人體內膽固醇含量變化與阿爾茨海默病，阿爾茨海默病，冠心病等多種疾病相關，人體中脂肪醇含量與Sjogren-Larsson綜合癥，DHAP合酶缺乏等疾病相關。因此，對生物樣本(如血漿，尿液，毛發)中醇類和α，β-不飽和酮類化合物進行定性和定量分析對研究許多生理變化和疾病診斷有非常重要的作用。

生物樣本(如尿液，毛發)中醇類和α，β-不飽和酮類化合物的分析方法主要是高效液相色譜-質譜(LC-MS)和氣相色譜-質譜(GC-MS)，但前處理較復雜，需要分離純化，不能滿足高通量篩選的需要，基質輔助激光解吸離子化-傅立葉變換離子回旋共振質譜(MALDI-FTMS)由于其高分辨率，高通量和高靈敏度而具有極大的優勢，簡化繁瑣的樣品處理步驟，FTMS的高分辨率是?我們能夠檢測復雜樣本中質荷比十分接近的化合物。MALDI-FTMS已被廣泛應用于分析各種生物樣本中內源性物質的定性和定量分析。

在已有報道的的生物樣本(如尿液，毛發)中醇類和α，β-不飽和酮類化合物的分析方法中，醇類化合物和酮類化合物由于其較弱的質子親和力和較弱的酸性，不易電離，在MALDI和ESI中信號較弱，靈敏度較低，且易被其他易電離的物質抑制。為了提高其質譜響應，已有各種不同的衍生化試劑被開發出，其中羥胺(參見Huang，G.M.；Chen，H.；Zhang，X.R.；Cooks，R.G.；Ouyang，Z.Anal.Chem.2007，79，8327-8332.)，吉拉爾特試劑P(Danaceau，J.P.；Scott?Morrison，M.；Slawson，M.H.J.Mass?Spectrom.2008，43，993-1000.)和吉拉爾特試劑T(Galesio，M.；Rial-Otero，R.；Capelo-Martinez，J.L.Rapid?Commun.Mass?Spectrom.2009，23，121783-1791.)被用于衍生化酮類化合物；甜菜醛(參見Wu，C.P.；Ifa，D.R.；Manicke，N.E.；Cooks，R.G.Anal.Chem.2009，81，7618-7624.)，2-吡啶甲酸(參見Higashi，T.；Shibayama，Y.J.；Shimada，K.J.Chromatogr.B?2007，846，195-201.)和丹磺酰氯(參見Tang，Z.M.；PeterGuengerich，F.Anal.Chem.2010，82，7706-7712.)被用于衍生化醇類化合物。但均有著其固有的缺點，例如這些試劑均有叔氨和季銨基團，在質譜中信號很強，又不易揮發，很難除去，從而影響目標化合物的檢測。而且這些試劑只能修飾一種類型的基團，能夠適用的待測物有限，從而使其應用領域非常狹窄。這些局限性都促使了新的衍生化方法的發展和應用。

此外，同位素標記的基團也常常引入衍生化試劑中，從而避免了使用價格昂貴又不易得到的具有相似結構的同位素內標，因為只要有目標化合物，同位素基團就可以通過同位素衍生化試劑引入目標化合物，從而得到結構相似的同位素內標(參見Guo，K.；Li，L.Anal.Chem.2009，81，3919-3932.Guo，K.；Ji，C.J.；Li，L.Anal.Chem.2007，79，8631-8638.Shimbo，K.；Yahashi，A.；Hirayama，K.；Nakazawa，M.；Miyano，H.Anal.Chem.2009，81，5172-5179.)。過?去已有同位素衍生化試劑用于標記氨基酸，多肽，雌激素和脂肪酸，但對標記醇類和酮類的同位素衍生化試劑和衍生方法卻未見報道。

發明內容