[發(fā)明專利]生物體樣品基質(zhì)輔助激光解吸離子化-傅立葉變換離子回旋共振質(zhì)譜分析方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110047082.1
• 申請日: 2011-02-25
• 公開（公告）號: CN102175750A
• 公開（公告）日: 2011-09-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郭寅龍;汪航;張立;張菁;王昊陽;劉素紅
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院上海有機(jī)化學(xué)研究所
• 主分類號: G01N27/62
• 分類號: G01N27/62;G01N1/28;C07D213/20;C07J3/00;C07J7/00;C07J9/00;C07J1/00
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司 31213
• 代理人: 鄔震中

1.一種生物體樣品分析方法，其特征是所述的生物樣品經(jīng)前處理分成兩等份，分別與吡啶和氘代吡啶進(jìn)行衍生化反應(yīng)，再經(jīng)基質(zhì)輔助激光解吸離子化-傅立葉變換離子回旋共振質(zhì)譜進(jìn)行分析醇類和α，β-不飽和酮類化合物；所述的生物體樣品是毛發(fā)或尿樣。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是通過下述步驟(1)～(3)、(1)～(4)、(5)～(7)或者(5)～(8)四種步驟進(jìn)行：

(1)將經(jīng)過前處理的毛發(fā)分成兩等份，分別加入二氯甲烷溶液提取兩次，合并有機(jī)層后氮氣吹干；

(2)將(1)獲得的第一份樣品加入50-100μL?10-40％的吡啶二氯甲烷溶液，再與50-100μL?10-40％的三氟甲磺酸酐二氯甲烷混合反應(yīng)5-20分鐘，(1)獲得的第二份樣品加入50-100μL?10-40％的氘代吡啶二氯甲烷溶液，再與50-100μL?10-40％的三氟甲磺酸酐二氯甲烷混合反應(yīng)5-20分鐘；

(3)將(2)獲得的兩份反應(yīng)液混合后再與基質(zhì)2，5-二羥基苯甲酸丙酮溶液以體積比1∶3混合，取1-2μL?點樣于靶上，基質(zhì)輔助激光解吸離子化-傅立葉變換離子回旋共振質(zhì)譜分析；通過對比二個基質(zhì)輔助激光解吸離子化-傅立葉變換離子回旋共振質(zhì)譜分析結(jié)果，獲得毛發(fā)樣品中醇類化合物定性結(jié)果；

(4)毛發(fā)樣品按照(1)的步驟與吡啶反應(yīng)獲得的反應(yīng)液，相同體積(V)的標(biāo)準(zhǔn)溶液以(1)步驟與氘代吡啶反應(yīng)獲得的反應(yīng)液，兩份反應(yīng)液混合，進(jìn)行基質(zhì)輔助激光解吸離子化-傅立葉變換離子回旋共振質(zhì)譜分析，樣品中目標(biāo)化合物的含量通過以下公式比較d₀/d₅峰對的峰強(qiáng)度和標(biāo)準(zhǔn)物含量計算得到定量：C_樣品為毛發(fā)中待測物含量，C_{標(biāo)液}為標(biāo)準(zhǔn)物含量，V為標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，I₀為MALDI-FTMS圖譜中毛發(fā)經(jīng)吡啶衍生后所得產(chǎn)物的峰強(qiáng)度，I₅為MALDI-FTMS圖譜中標(biāo)準(zhǔn)物經(jīng)氘代吡啶衍生化后所得產(chǎn)物的峰強(qiáng)度，w為毛發(fā)重量；

(5)將尿樣1-2mL分成兩等份，各加入100-200μL?2M的醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH?5.4-5.8)和50-100μL?β-葡萄糖苷酶/硫酸酯酶，37-55℃酶解3-5h，分別加入2.5-5mL的叔丁基甲基醚(TBME)提取兩次，合并有機(jī)層后氮氣吹干；

(6)將(5)獲得的的第一份加入50-100μL?10-40％的吡啶二氯甲烷溶液，再與50-100μL?10-40％的三氟甲磺酸酐二氯甲烷混合反應(yīng)5-20分鐘，(5)獲得的第二份加入50-100μL?10-40％的氘代吡啶二氯甲烷溶液，再與50-100μL?10-40％的三氟甲磺酸酐二氯甲烷混合反應(yīng)5-20分鐘；

(7)將(6)獲得的兩份反應(yīng)液混合后再與基質(zhì)2，5-二羥基苯甲酸丙酮溶液以體積比1∶3混合，取1-2μL點樣于靶上，基質(zhì)輔助激光解吸離子化-傅立葉變換離子回旋共振質(zhì)譜分析結(jié)果，獲得毛發(fā)樣品中酮類化合物定性結(jié)果；或

(8)尿樣按照(5)的步驟與吡啶反應(yīng)獲得的反應(yīng)液，相同體積的標(biāo)準(zhǔn)溶液以(5)步驟與氘代吡啶反應(yīng)；兩份反應(yīng)液混合，用基質(zhì)輔助激光解吸離子化-傅立葉變換離子回旋共振質(zhì)譜分析，樣品中目標(biāo)化合物的含量通過以下公式比較d₀/d₅峰對的峰強(qiáng)度和標(biāo)準(zhǔn)物含量計算得到：C_樣品為尿樣中待測物含量，C_{標(biāo)液}為標(biāo)準(zhǔn)物含量，I₀為MALDI-FTMS圖譜中尿樣經(jīng)吡啶衍生后所得產(chǎn)物的峰強(qiáng)度，I₅為MALDI-FTMS圖譜中標(biāo)準(zhǔn)物經(jīng)氘代吡啶衍生化后所得產(chǎn)物的峰強(qiáng)度；

所述的2，5-二羥基苯甲酸丙酮溶液是含有100-200mg/mL?2，5-二羥基苯甲酸的丙酮溶液。

3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征是所述的醇類化合物是脂肪醇、薄荷醇、膽固醇、維生素A、維生素D₃、乙醇、環(huán)己醇、正丁醇、環(huán)己烯酮或丙烯醛。

4.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征是所述的α，β-不飽和酮類化合物甾體類化合物是雄烯二酮、甲睪酮、雄二烯二酮、美雄酮、睪酮、雄酮、脫氫異雄酮、丙酸睪酮、苯丙酸諾龍、左炔諾酮或19-去甲雄酮。