[發(fā)明專利]一種提取分離高純度杯莧甾酮的制備工藝

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110045286.1
• 申請(qǐng)日: 2011-02-25
• 公開（公告）號(hào): CN102649803A
• 公開（公告）日: 2012-08-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李法慶;劉東鋒
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C07J17/00
• 分類號(hào): C07J17/00
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技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及一種采用大孔樹脂和高速逆流色譜法分離制備高純度杯莧甾酮的工藝。

背景技術(shù)：

川牛膝(Cyathula?officinalis?Kuan.)為莧科杯莧屬多年生草本植物，別名甜膝，主要分布于四川、云南和貴州，野生或栽培，生長(zhǎng)于海拔1500米以上的地區(qū)，為著名的川產(chǎn)地道中藥材，是極常用且是重要的出口品種。川牛膝的主要成分為生物堿、川牛膝主要和含甾類化合物、皂苷、多糖和少量異黃酮類以及多種微量元素等化學(xué)成分，其中甾類化合物包括杯莧甾酮、異杯莧甾酮、5-表杯莧甾酮、羥基杯莧甾酮、蛻皮甾酮、莧菜甾酮A及B、頭花杯莧甾酮、前杯莧甾酮、后甾酮等。黎萬(wàn)壽等的藥理研究表明，杯莧甾酮對(duì)去勢(shì)小鼠的體重和子宮系數(shù)有增加趨勢(shì)，子宮濕重有顯著增長(zhǎng)，提示其為川牛膝的雌激素樣活性的有效成分；杯莧甾酮能增加去勢(shì)大鼠提肛肌重量，提示其有蛋白質(zhì)同化作用；實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，杯莧甾酮的藥理活性與川牛膝強(qiáng)筋健骨“其滋補(bǔ)之功如牛之多力也”相符，與中醫(yī)臨床用藥功能主治基本吻合，可以作川牛膝的對(duì)照品。

現(xiàn)常采用醇提、氧化鋁柱層析分離等對(duì)杯莧甾酮進(jìn)行提取分離，由于生產(chǎn)周期長(zhǎng)、制備量小、純度低，難以滿足需要，本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種提取分離高純度杯莧甾酮的制備工藝。

高速逆流色譜(High?Speed?Countercurrent?Chromatography，簡(jiǎn)稱HSCCC)是國(guó)際上于上世紀(jì)80年代以來在液-液分配色譜基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新型分離技術(shù)，其分離原理是利用螺旋柱在高速行星運(yùn)動(dòng)時(shí)產(chǎn)生的巨大離心力，使螺旋柱中互不相容的兩相不斷混合，達(dá)到穩(wěn)定的流體動(dòng)力學(xué)平衡態(tài)，此時(shí)在螺旋柱中任何一部分，兩相溶劑都反復(fù)進(jìn)行著混合和靜置的分配過程，這一過程頻率極高，當(dāng)柱心以800rpm旋轉(zhuǎn)時(shí)，頻率超過每秒13次。流動(dòng)相不斷地穿過固定相，同時(shí)保留其中的一相(固定相)，利用橫流泵連續(xù)輸入另一相(流動(dòng)相)，流動(dòng)相載著溶質(zhì)(樣品)進(jìn)入螺旋柱并不斷反復(fù)穿過固定相，使樣品再兩相之間也不斷反復(fù)地進(jìn)行分批額，由于樣品中各組分再兩相中分配系數(shù)不同，導(dǎo)致在螺旋柱中的移動(dòng)速度不同，因而能使樣品各組分按分配系數(shù)的次序，依次得到分離。

高速逆流色譜作為一種新型的分配技術(shù)，有許多優(yōu)點(diǎn)是傳統(tǒng)液-固色譜無法比擬的，因而有很廣闊的應(yīng)用前景。首先，它的流動(dòng)相、固定相均為液體，不需要固體載體，避免了液-固色譜常會(huì)造成的固體載體對(duì)樣品的不可逆吸附，可以保證樣品再不損失任何一種組分的情況下得到分離，理論上樣品回收率相當(dāng)高；其次，它的分離效率高，可以達(dá)到幾千個(gè)理論塔板數(shù)，尤其在天然產(chǎn)物組分分離提取中有較高的分離度，有的樣品經(jīng)過一次分離就可以得到一個(gè)甚至多個(gè)單體，并且分離時(shí)間也短，一般是幾個(gè)小時(shí)即可完成一次分離；此外，它使用常規(guī)試劑，有廣泛的液-液分配體系可供選擇，體系更換方便、快捷；它的進(jìn)樣量大，可以從毫克到克量級(jí)，進(jìn)樣體積可達(dá)20ml以上，這對(duì)于樣品的純化制備顯示出驚人的優(yōu)勢(shì)。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的是提供一種提取分離高純度杯莧甾酮的制備工藝，所得產(chǎn)品杯莧甾酮含量達(dá)98％以上。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種提取分離高純度杯莧甾酮的制備工藝，其特征在于：將牛膝藥材粉碎過20-50目篩，加入5-10倍量提取溶劑，加熱至60-80℃，提取2-3次，每次1-3小時(shí)，合并提取液，減壓回收乙醇，所得提取物用大孔樹脂吸附，先用水洗至色淡，再用60-80％乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，得到總甾酮浸膏；將總甾酮浸膏采用高速逆流色譜分離制備高純度杯莧甾酮，所得產(chǎn)品杯莧甾酮含量為98％以上。

所述提取溶劑為50-95％的乙醇水溶液。

所述大孔樹脂柱分離采用濕法裝柱，洗脫液減壓回收至相對(duì)密度1.15-1.20(60℃測(cè))。

所述高速逆流色譜分配系統(tǒng)為庚烷-甲醇-二氯甲烷或正己烷-乙腈-丙酮，三種組分的體積比為(5-12)∶(9-12)∶(1-5)。

所述高速逆流色譜恒溫循環(huán)器溫度為25-28℃。

所述高速逆流色譜流動(dòng)相的流速為2-5ml/min。

所述高速逆流色譜達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡后，將樣品溶液泵入色譜系統(tǒng)中，同時(shí)在出液端接紫外檢測(cè)器，在246nm波長(zhǎng)處對(duì)流出液連續(xù)檢測(cè)，與杯莧甾酮的標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)應(yīng)，收集液蒸除溶劑，干燥即得產(chǎn)品。

本發(fā)明采用大孔樹脂吸附，處理量大；通過采用合理的溶劑體系、控制主機(jī)轉(zhuǎn)速和流動(dòng)相流速，可得到高純度的杯莧甾酮，整個(gè)工藝條件溫和、損失少。

具體實(shí)施方式：

實(shí)施例1：