[發明專利]復制缺陷甲病毒表達載體系統及疫苗制備方法

無效

• 申請號: 201110043401.1
• 申請日: 2011-02-23
• 公開（公告）號: CN102443603A
• 公開（公告）日: 2012-05-09
• 發明（設計）人: 彭濤;劉鈿蓮;王弋
• 申請（專利權）人: 廣東華南聯合疫苗開發院有限公司
• 主分類號: C12N15/86
• 分類號: C12N15/86;A61K39/00;A61K39/125;A61K39/13;A61P31/14
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 李柏林

1.復制缺陷型甲病毒表達載體系統，包括甲病毒復制子系統和甲病毒輔助包裝系統，甲病毒復制子系統的復制子含有至少一個啟動子和去除了編碼結構蛋白序列的甲病毒核酸序列，甲病毒輔助包裝系統的結構蛋白輔助子含有編碼甲病毒結構蛋白序列的反義核酸序列，反義核酸序列的5’端連接有基因復制調控開關核酸序列，基因復制調控開關核酸序列的5’端連接有基因復制啟動子。

2.根據權利要求1所述的復制缺陷甲病毒表達載體系統，其特征在于：結構蛋白復輔助子的甲病毒結構蛋白序列的反義核酸序列和基因復制調控開關核酸序列之間設有亞基因組增強子。

3.根據權利要求1所述的復制缺陷甲病毒表達載體系統，其特征在于：甲病毒復制子系統的復制子和甲病毒輔助包裝系統的結構蛋白復輔助子的核酸序列連接在不同的質粒中。

4.根據權利要求1所述的復制缺陷型甲病毒表達載體系統，其特征在于：基因復制調控開關為動物、植物、細菌、病毒的抑制子。

5.根據權利要求4所述的復制缺陷甲病毒表達載體系統，其特征在于：基因復制調控開關為四環素抑制子。

6.根據權利要求1所述的復制缺陷甲病毒表達載體系統，其特征在于：甲病毒為基孔肯雅病毒。

7.一種疫苗制備方法，包括以下步驟：

1)????將病菌的免疫原序列插入到權利要求1或3所述的甲病毒復制子系統的復制子，取代原甲病毒核酸序列的結構蛋白序列，得到免疫原復制子；

2)????將權利要求1或3所述的甲病毒輔助包裝系統的結構蛋白輔助子轉染表達基因復制調控開關核酸序列抑制蛋白的細胞，得到結構蛋白輔助細胞；

3)????在結構蛋白輔助細胞的培養基中加入與基因復制調控開關核酸序列抑制蛋白結合的底物，解除細胞對結構蛋白表達的抑制；

4)????使用免疫原復制子轉染解除結構蛋白表達抑制的輔助細胞，包裝得到大量具有感染力的重組甲病毒；

5)????使用重組甲病毒感染正常細胞，得到大量免疫原，進而使用免疫原制備得到疫苗。

8.根據權利要求7所述的疫苗制備方法，其特征在于：免疫原序列為腸道病毒亞單位蛋白序列或整個腸道病毒結構基因。

9.根據權利要求8所述的疫苗制備方法，其特征在于：腸道病毒為EV71、cosA16、cosB3、脊髓灰質炎病毒。