[發明專利]用于檢測誘惑紅的方法及酶聯免疫試劑盒

無效

• 申請號: 201110035545.2
• 申請日: 2011-02-01
• 公開（公告）號: CN102313808A
• 公開（公告）日: 2012-01-11
• 發明（設計）人: 張波;王飛;郗日沫;王鵬;易建;張霞;薛秋艷;徐德順
• 申請（專利權）人: 天津百鷗瑞達生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 楊宏軍;尚繼棟

技術領域

本發明涉及一種檢測誘惑紅的方法及酶聯免疫試劑盒。

背景技術

誘惑紅是食用色素的一種，呈鮮艷的深紅色，單色品種。該色素穩定性優良，被廣泛用于食品、飲料、藥品、化妝品、飼料、煙草、玩具、食品包裝材料等的著色。水溶性合成色素，鮮艷的深紅色，應用于糖果包衣、冰淇淋、雪糕、糖果、糕點、飲料等的著色。

但是長期食用誘惑紅對身體會產生危害，為一般毒性、致瀉性甚至致癌性，尤其是偶氮化合物類合成色素的致癌作用明顯。偶氮化合物在體內分解，可形成丙種芳香胺化合物，芳香胺在體內經過代謝活動后與靶細胞作用可能引起癌變。此外，食用合成色素在生產過程中還可能混入砷和鉛，能導致皮下肉瘤、肝癌、腸癌及惡性淋巴癌等。

誘惑紅屬于食用紅色色素。中國《食品添加劑使用衛生標準》(GB2760？D1996)中規定：誘惑紅可用于糖果包衣，最大使用量0.085g/kg；用于冰淇淋、雪糕、蘋果干、燕麥片(調香、調色載體)、可可玉米片(即食早餐谷類食品)為0.07g/kg；用于炸雞調料為0.04g/kg；用于冰棍、糖果、糕點彩裝、紅綠絲、染色櫻桃罐頭、紅腸腸衣、果汁飲料、果汁酒(色淀除外)，最大用量0.05g/kg；用于果汁(味)型飲料，0.025g/kg(按稀釋6倍計)。

通常，檢測誘惑紅的方法主要有高效液相色譜法(HPLC)、紙上層析法、分光光度法等等。HPLC法與分光光度法是誘惑紅殘留檢測的確證方法，其優點是檢測精確度高，但因其儀器化程度高、檢測時間長、過程繁瑣、檢測費用昂貴等而阻礙其推廣應用。理化檢測法多以有機溶劑萃取后過層析柱，然后觀察顏色進行誘惑紅殘留的判斷，此方法主觀性強，對微量殘留很難進行測定，而且無法定量，因此很難符合檢測單位實際使用的要求。而酶聯免疫分析(ELISA)快速檢測技術因靈敏度高、特異性好、既可定性又可定量，且成本低、操作簡單快速、一次檢測樣本量大、儀器化程度低，現已成為常用的篩選方法。并且經過檢索相關的文獻與專利并未發現國內外有關于誘惑紅免疫檢測的方法與試劑盒。

總之，現有酶聯免疫試劑盒采用的檢測方法復雜、繁瑣，很難應用于實踐，且現有技術由于普遍存在穩定性差、樣品前處理及檢測步驟復雜、設備條件要求較高、價格昂貴等不足，嚴重影響了誘惑紅殘留檢測與監控，因此研制穩定性高、操作簡單、設備要求低、廉價的誘惑紅ELISA檢測試劑盒具有非常重要的經濟和社會意義。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種檢測誘惑紅的酶聯免疫試劑盒。本發明所提供的檢測誘惑紅的酶聯免疫試劑盒，包括誘惑紅半抗原和誘惑紅的特異性抗體；所述特異性抗體為誘惑紅的多克隆抗體或單克隆抗體；其中，所述半抗原和誘惑紅的特異性抗體可以以下述任一種形式存在：

1)將誘惑紅半抗原與載體蛋白進行偶聯，得到誘惑紅半抗原與載體蛋白的偶聯物(以下稱為半抗原-載體蛋白偶聯物)，將其作為包被原，所述特異性抗體進行酶標記后作為酶標記物；

2)所述特異性抗體為包被原，所述半抗原進行酶標記后作為酶標記物。

所述試劑盒還可以既包括半抗原和誘惑紅的特異性抗體，又包括抗抗體；所述抗抗體為羊抗鼠抗抗體或羊抗兔抗抗體；其中，所述半抗原和抗抗體以下述任一形式存在：

1)將所述半抗原與載體蛋白進行偶聯，得到半抗原-載體蛋白偶聯物，將其作為包被原，所述抗抗體進行酶標記后作為酶標記物；

2)所述抗抗體為包被原，所述半抗原進行酶標記后作為酶標記物。

所述誘惑紅多克隆抗體或誘惑紅單克隆抗體，均是用所述誘惑紅半抗原-載體蛋白偶聯物作為免疫原得到的；所述載體蛋白可為甲狀腺蛋白、鼠血清蛋白、人血清蛋白、牛血清蛋白、兔血清蛋白、血藍蛋白或卵清蛋白等。

所述單克隆抗體是通過雜交瘤細胞技術得到的。所述誘惑紅多克隆抗體可為鼠源、馬源、羊源、兔源或豚鼠源抗體。

為了方便檢測，所述試劑盒還可包括酶標板，當所述誘惑紅特異性抗體或抗抗體用酶進行標記時，所述酶標板上包被有所述誘惑紅半抗原或誘惑紅半抗原-載體蛋白偶聯物；當所述半抗原用酶進行標記時，所述酶標板上包被有所述誘惑紅特異性抗體或所述抗抗體。

為了更方便現場監控和大量樣本篩查，所述試劑盒還可包括誘惑紅標準品溶液、顯色液、終止液、濃縮洗滌液、濃縮復溶液中的至少一種；