[發明專利]用于檢測誘惑紅的方法及酶聯免疫試劑盒

無效

• 申請號: 201110035545.2
• 申請日: 2011-02-01
• 公開（公告）號: CN102313808A
• 公開（公告）日: 2012-01-11
• 發明（設計）人: 張波;王飛;郗日沫;王鵬;易建;張霞;薛秋艷;徐德順
• 申請（專利權）人: 天津百鷗瑞達生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 楊宏軍;尚繼棟

1.一種檢測誘惑紅的酶聯免疫試劑盒，包括誘惑紅半抗原和誘惑紅的特異性抗體；所述特異性抗體為誘惑紅的多克隆抗體或單克隆抗體。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：

1)所述半抗原與載體蛋白偶聯，得到的半抗原-載體蛋白偶聯物作為包被原，所述特異性抗體為酶標記的；或者

2)所述特異性抗體為包被原，所述半抗原為酶標記的。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括抗抗體，如羊抗鼠抗抗體或羊抗兔抗抗體；并且：

1)所述半抗原與載體蛋白偶聯，得到的半抗原-載體蛋白的偶聯物作為包被原，所述抗抗體為酶標記的；

2)所述抗抗體作為包被原，所述半抗原為酶標記的。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括誘惑紅標準品溶液、底物顯色液、終止液、濃縮洗滌液、濃縮復溶液中的至少一種。

5.根據權利要求1-3中任一項所述的試劑盒，其特征在于：所述誘惑紅半抗原或誘惑紅半抗原-載體蛋白偶聯物、所述誘惑紅特異性抗體、所述抗抗體中的任一種已包被在酶標板上。

6.根據權利要求1-3中任一項所述的試劑盒，其特征在于：所述酶標記中所用的標記酶為辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶；當標記酶為辣根過氧化物酶時，使用的底物顯色液為過氧化氫或過氧化脲、四甲基聯苯胺硫酸鹽混合溶液，終止液為1-2mol/L硫酸溶液或鹽酸溶液；當標記酶為堿性磷酸酶時，使用的顯色劑為硝基磷酸鹽緩沖液，終止液為1-2mol/L氫氧化鈉溶液。

7.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于：所述濃縮洗滌液為pH值為6-9、含有終濃度為0.02-0.05％(質量)的防腐劑、終濃度為1.0-2.0％(質量)的吐溫-20、0.1-0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液，優選地，所述濃縮洗滌液為pH值為7.4、含有終濃度為0.03％(質量)的防腐劑、終濃度為1.5％(質量)的吐溫-20的0.2mol/L磷酸鹽緩沖液；所述濃縮復溶液為含有終濃度為5-10％(質量)的DMSO、pH為6-8的0.1-0.2mol/L磷酸鹽緩沖液，優選地，所述濃縮復溶液為含有終濃度為8％(質量)的DMSO、pH為7.4的0.2mol/L磷酸鹽緩沖液；所述底物顯色液為過氧化氫或過氧化脲、四甲基聯苯胺硫酸鹽混合溶液；所述終止液為2mol/L硫酸溶液或鹽酸溶液。

8.一種檢測樣品中的誘惑紅含量的方法，包括以下步驟：

1)用誘惑紅半抗原或誘惑紅半抗原-載體蛋白偶聯物包被酶標板；

2)將誘惑紅標準品或待測樣品加入所述包被的酶標板孔內，然后每孔加入酶標記的誘惑紅特異性抗體，孵育，洗滌；

3)加入底物顯色液顯色；

4)加入反應終止液終止反應；

5)通過比較誘惑紅標準品與待測樣品的顏色，推測出待測樣品中的誘惑紅含量；或者，測定各孔的吸光度，建立誘惑紅濃度相對于吸光度的標準曲線，并根據該標準曲線由待測樣品的吸光度推算出待測樣品中的誘惑紅含量。

9.一種檢測樣品中的誘惑紅含量的方法，包括以下步驟：

1)用誘惑紅半抗原或誘惑紅半抗原-載體蛋白偶聯物包被酶標板；

2)加入誘惑紅標準品或待測樣品；

3)加入誘惑紅特異性抗體，孵育，洗滌；

4)加入酶標記的抗抗體，孵育，洗滌；

5)加入底物顯色液顯色；

6)加入反應終止液終止反應；

7)通過比較誘惑紅標準品與待測樣品的顏色，推測出待測樣品中的誘惑紅含量；或者，測定各孔的吸光度，建立誘惑紅濃度相對于吸光度的標準曲線，并根據該標準曲線由待測樣品的吸光度推算出待測樣品中的誘惑紅含量。

10.根據權利要求8或9所述的檢測樣品中誘惑紅含量的方法，還包括樣品前處理步驟，其中：

當所述樣品為液體食品時，所述樣品前處理方法為：將液體食品除去氣體，與樣本稀釋液以體積比1∶10-15混合，取混合后樣品用于分析；

當所述樣品為糖果、話梅類食品時，所述樣品前處理方法為：將待檢物粉碎，與樣本稀釋液以質量體積比為1∶5-10混勻，離心，取上清與樣本稀釋液以一定比例稀釋后檢測。

當所述樣品為冰激凌、糕點時，樣品置于水浴溶解，均質化，加一定量的正己烷脫脂，與樣本稀釋液以質量體積比為1∶10-15混勻，離心，取下層檢測。