[發(fā)明專利]紅葉石楠離體葉片體細(xì)胞胚誘導(dǎo)快繁培養(yǎng)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110033701.1
• 申請(qǐng)日: 2011-01-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102124955A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁慧敏;夏陽(yáng);燕麗萍;朱曉花;李雙云;劉翠蘭;劉艷;劉進(jìn)華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院;山東省林業(yè)科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 南京縱橫知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32224
• 代理人: 董建林;嚴(yán)志平

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種紅葉石楠離體葉片體細(xì)胞胚誘導(dǎo)快繁培養(yǎng)方法，屬于植物學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

紅葉石楠(Photiniaⅹfrasery)是光葉石楠(P.glabra)和石楠(P.serrulata)的雜交種，屬于薔薇科石楠屬常綠闊葉小喬木或多枝叢生灌木,?其廣泛分布于日本、美國(guó)及歐洲等地，因其新梢和嫩葉鮮艷如火，亮麗持久,修剪后萌芽力強(qiáng),?株形緊湊,在園林景觀中常用做高檔色帶；或培育成獨(dú)干、球形樹(shù)冠，在綠地中孤植；或作行道樹(shù)；或盆栽后布置于門廊或室內(nèi)，效果均佳，其為一種觀賞價(jià)值極高的園林植物。

自上世紀(jì)九十年代紅葉石楠被引入我國(guó)以來(lái)，其就被列為具有較高開(kāi)發(fā)價(jià)值的彩葉樹(shù)種，但紅葉石楠與我國(guó)許多原產(chǎn)樹(shù)種相比，在我國(guó)種源稀少,至今未見(jiàn)有結(jié)實(shí)的報(bào)道，而從國(guó)外引入的優(yōu)良品種也因長(zhǎng)期扦插繁殖，易感染葉斑病等真菌性病害，春夏季其又易受蚜蟲(chóng)危害，其病毒嚴(yán)重，葉片花斑易脫落，觀賞性下降，良種化程度降低；而劣質(zhì)種苗的使用又導(dǎo)致紅葉石楠固有的優(yōu)良特性日益喪失，這在一定程度上約束了該樹(shù)種的發(fā)展和推廣應(yīng)用，因此,?選擇、繁育優(yōu)良紅葉石楠品系成為一個(gè)十分突出的生產(chǎn)問(wèn)題,?組培快繁是紅葉石楠良種產(chǎn)業(yè)化的一種有效途徑，相關(guān)方面的報(bào)道也較多，但有關(guān)紅葉石楠葉片直接誘導(dǎo)體細(xì)胞胚及再生快繁系統(tǒng)的技術(shù)研究未見(jiàn)有成功的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種取材方便但種子繁殖困難的優(yōu)良紅葉石楠株系葉片直接誘導(dǎo)體胚的形成并獲得再生植株的紅葉石楠離體葉片體細(xì)胞胚誘導(dǎo)快繁培養(yǎng)方法，以及利用胚狀體再生植株葉片誘導(dǎo)體胚和不定芽的形成或直接誘導(dǎo)不定芽的形成獲得高頻再生植株，以解決優(yōu)良種苗種質(zhì)退化的問(wèn)題，為生產(chǎn)上提供量大質(zhì)優(yōu)、提純復(fù)壯的脫毒紅葉石楠苗木；

本發(fā)明的另一目的是提供一種為紅葉石楠遺傳轉(zhuǎn)化或誘變育種選育新品種提供一個(gè)理想的受體系統(tǒng)。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：

一種紅葉石楠離體葉片體細(xì)胞胚誘導(dǎo)快繁培養(yǎng)方法，包括以下步驟：

（1）建立紅葉石楠無(wú)菌試管苗再生體系：

（1.1）選材與材料處理：于春季晴天上午選取生長(zhǎng)健壯、性狀表現(xiàn)優(yōu)良的單株，用5%多菌靈噴灑選取的枝條，每周噴灑一次，連續(xù)噴灑一個(gè)月，之后剪取剛萌發(fā)的無(wú)病蟲(chóng)嫩枝，包括前端未木質(zhì)化和半木質(zhì)化部分，除去多余的莖葉，將需要部分用洗潔精溶液浸泡5-10min，然后用棉球仔細(xì)清洗后，再用流水沖洗1小時(shí)，最后用2%NaClO溶液浸泡15-20min,再用無(wú)菌水沖洗干凈，用滅菌濾紙吸干水分后備用；

（1.2）選材消毒與芽啟動(dòng)萌發(fā)培養(yǎng)：將步驟（1.1）所述的處理過(guò)的材料置于超凈工作臺(tái)上，用75％的酒精消毒15-20s，無(wú)菌水沖洗5-6次，再用0．1％升汞滅菌8-15min，無(wú)菌水沖洗6—8次，用滅菌濾紙吸干水分，然后剪取1-2cm左右?guī)б粋€(gè)腋芽或頂芽的莖段，以生態(tài)學(xué)下段垂直插入芽啟動(dòng)培養(yǎng)基上，每瓶接種3個(gè)外植體，誘導(dǎo)頂芽和腋芽萌發(fā)，在培養(yǎng)室溫度白天25±2℃?，夜晚20±2℃，光照強(qiáng)度1500—2000?lx，光照時(shí)間14?h／d的條件下，進(jìn)行15-20d的培養(yǎng)，莖段腋芽開(kāi)始萌動(dòng)，莖尖明顯伸長(zhǎng)，40-50d后芽點(diǎn)長(zhǎng)成2-4cm的新梢，形成無(wú)菌試管苗；

（1.3）無(wú)菌試管苗增殖培養(yǎng)：將步驟（1.2）誘導(dǎo)出的無(wú)菌試管苗去掉基部葉片，切成含1-2個(gè)腋芽的莖段或莖尖接種在試管苗增殖培養(yǎng)基上，25-28d后繼代1次，通過(guò)上述試管苗增殖培養(yǎng)基的NAA濃度在0.1～0.5mgL^-1的可控范圍內(nèi)調(diào)整變化，獲得大量無(wú)菌試管苗，建立起紅葉石楠無(wú)菌試管苗再生體系；

（2）建立離體葉片體胚和不定芽誘導(dǎo)的高頻快繁體系：

（2.1）誘導(dǎo)體胚和不定芽的形成：以試管苗第3到第6片展開(kāi)葉為外植體，葉片帶短葉柄，將葉片周圍帶鋸齒狀葉緣切去，之后做以下處理：一、葉片沿主脈切成左右兩半，視葉片大小輕劃1-2刀；二、葉片沿主脈橫切2-3刀，分別接種在第一誘導(dǎo)體胚和/或不定芽形成培養(yǎng)基、第二誘導(dǎo)體胚和/或不定芽形成培養(yǎng)基和第三誘導(dǎo)體胚和/或不定芽形成培養(yǎng)基上，要求外植體葉背朝下緊貼各自的培養(yǎng)基放置，于黑暗培養(yǎng)7-10d，誘導(dǎo)體胚的形成，于黑暗培養(yǎng)15-20d，誘導(dǎo)不定芽的形成；