[發明專利]一種檢測多種常見氨基酸的液相色譜方法

有效

• 申請號: 201110032844.0
• 申請日: 2011-01-30
• 公開（公告）號: CN102621250A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 段更利;周威
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.一種檢測多種常見氨基酸的液相色譜方法，其特征在于，其包括步驟：將待測樣品經過樣品預處理后，加入反應溶劑及衍生化試劑進行衍生化反應，然后采用高效液相色譜法測定20種常見氨基酸衍生物的濃度，確定氨基酸的含量。

2.按權利要求1所述的檢測多種常見氨基酸的液相色譜方法，其特征在于，所述的反應試劑為不含有活潑胺基的有機溶劑，選自乙腈、甲醇、丙酮、四氫呋喃、甲苯、苯或乙醚。

3.按權利要求1所述的檢測多種常見氨基酸的液相色譜方法，其特征在于，所述的樣品預處理是，取適量待測中性水溶液樣品，加入乙腈稀釋或沉淀蛋白。

4.按權利要求1所述的檢測多種常見氨基酸的液相色譜方法，其特征在于，所述的樣品選自植物天然提取物、藥品、保健食品或飼料；或血漿、尿液、腦脊液、生物組織材料。

5.按權利要求1所述的檢測多種常見氨基酸的液相色譜方法，其特征在于，按下述步驟測定動植物天然提取物、藥品、保健食品或飼料中20種常見氨基酸濃度：

定量分取動植物天然提取物樣品，加入定量的反應試劑混勻，再加入硼酸鹽緩沖液及過量的衍生化試劑進行反應，渦旋混勻，放置一段時間后，用液相色譜法測定氨基酸衍生物的濃度；

所述的衍生化試劑為9-氯甲酸芴甲酯，其分子式為FMOC-Cl，結構式如通式(Ⅰ)，

??????????????????????????????????????????????????????????????；

其按式(Ⅱ)與氨基酸進行衍生反應，

式(Ⅱ)中，R和R’均表示烷基、芳基、烷基取代芳基或者含雜原子基團；

所述的反應試劑為不含有活潑胺基的有機溶劑，選自乙腈、甲醇、丙酮、四氫呋喃、甲苯、苯或乙醚；

所述的高效液相色譜法，是采用紫外檢測器測定20種常見氨基酸衍生物的峰面積，用標準曲線校正方程換算成氨基酸的濃度；其中，液相色譜柱采用通用型，填料選自十八烷基鍵合相硅膠或辛烷基鍵合相硅膠；流動相由乙腈和?50?mM???pH值為4.15的乙酸鈉緩沖液組成，梯度洗脫，檢測波長為UV?263nm。

6.按權利要求1所述的檢測多種常見氨基酸的液相色譜方法，其特征在于，按下述步驟測定血漿、尿液、腦脊液、生物組織材料中20種常見氨基酸濃度，?

定量稱取待測樣品，加入定量的蛋白沉淀試劑，渦旋混勻，高速離心，取上清液，加入硼酸鹽緩沖液及過量的衍生化試劑反應，渦旋混勻，放置一段時間后，用液相色譜法測定氨基酸衍生物的濃度；

所述的蛋白沉淀試劑選自乙腈或者甲醇；

所述的高效液相色譜法，是采用紫外檢測器測定20種常見氨基酸衍生物的峰面積，用標準曲線校正方程換算成氨基酸的濃度；其中，液相色譜柱采用通用型，填料選自十八烷基鍵合相硅膠或辛烷基鍵合相硅膠；流動相由乙腈和?50?mM??pH值為4.15的乙酸鈉緩沖液組成，梯度洗脫，檢測波長為UV?263nm。

7.按權利要求5或6的方法，其特征在于，所述的20種常見氨基酸的線性范圍為0.17～98.40?μg/mL。

8.按權利要求5或6的方法，其特征在于，所述的20種常見氨基酸的最低檢測限為0.05～0.13?μg/mL，其中，進樣量為20?μL。

9.權利要求1的檢測多種常見氨基酸的液相色譜方法在測定中藥板藍根中氨基酸濃度中的用途。