[發明專利]一種熒光定量PCR技術檢測ERCC1 mRNA表達量的試劑盒

無效

• 申請號: 201110032311.2
• 申請日: 2011-01-28
• 公開（公告）號: CN102154475A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發明（設計）人: 劉輝;劉亞莉;張敬磊;周偉平
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 上海德昭知識產權代理有限公司 31204
• 代理人: 丁振英

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種利用熒光定量PCR技術檢測ERCC1?mRNA表達量的試劑盒。

背景技術

自從1967年人們發現順鉑有抗癌活性以來，鉑類金屬抗癌藥物的應用和研究得到了迅速發展。順鉑具有抗癌譜廣、作用強等特點，為當前化療中最常用的藥物之一，鉑類藥物通過與細胞內DNA結合，導致DNA鏈間交鏈或鏈內交鏈，引起DNA損傷，從而導致細胞死亡。而順鉑等細胞毒性化療藥物對腫瘤損傷后，腫瘤細胞的DNA修復機制啟動，具有較高修復能力的腫瘤細胞易于對化療耐藥。

研究提示，DNA修復基因的表達狀況可以作為化療療效相對理想的預測因子。核苷酸切除修復(NER)與鉑類耐藥關系密切，其中切除修復交叉互補基因1(ERCC1)是參與該修復過程并導致鉑類耐藥的重要因子(van?Duin?M，de?Wit?J，Odijk?H，et?a1.Molecular?characterization?of?the?human?excision?repair?gene?ERCC-1：cDNA?cloning?and?amino?acid?homology?with?the?yeast?DNA?repair?gene?RAD10.Cell.1986；44(6)：913-923)。近年來的研究發現ERCC1基因表達水平的高低與乳腺癌、肝癌、食管癌、胃癌、卵巢癌以及非小細胞肺癌的發病、生物學特性以及預后均有關(McDaniel?LD，Schultz?RA.XPF/ERCC4?and?ERCC1：their?products?and?biological?roles.Adv?Exp?Med?Biol.2008；637：65-82)。ERCC1不同的表達與非小細胞肺癌治療的選擇、手術后藥物的應用以及預后判斷密切相關(Simon?GR，Begum?M，Bepler?G.Setting?the?stage?for?tailored?chemotherapy?in?the?management?of?non-small?cell?lung?cancer.Future?Oncol.2008Feb；4(1)：51-59)。有文獻報告，在早期非小細胞肺癌患者手術后ERCC1高表達者，其生存時間顯著延長，預后好。可作為指導非小細胞肺癌預后的獨立的預測指標；而在接受鉑類藥物化療較晚期的非小細胞肺癌患者中，ERCC1陽性表達者反而較陰性表達者預后差，ERCC1陰性者無病生存期及總的生存期較ERCC1陽性者明顯延長。體內和體外研究進一步證實ERCC1基因的表達水平同時與細胞對鉑類藥物的抵抗性呈正相關，ERCC1的高表達是導致腫瘤細胞對鉑類藥物耐藥的最重要的機制之一(Martin?L?P，Hamilton?TC，Schilder?RJ.Platinum?resistance：the?role?of?DNA?repair?pathways.Clin?Cancer?Res.2008；14(5)：1291-1295)。

ERCC1編碼的273個氨基酸的蛋白質不具有核苷酸切除修復功能，所以在研究ERCC1與化療療效關系時，應用免疫組化定量檢測ERCC1蛋白含量不能反映ERCC1基因功能，而可采用敏感性及特異性均較高的熒光定量PCR檢測其mRNA水平。同時目前臨床上常用的非小細胞肺癌的病理類型和臨床分期等對于預測患者療效和生存期并不理想，大量研究都希望能找到一些相關的非小細胞肺癌分子標記物，以期對患者的治療和預后提供更有益的幫助。ERCC1基因表達就適應了這種要求，它不但對于非小細胞肺癌的預后估計有所幫助，而且對于手術后輔助化療的藥物選擇更有指導意義。

目前尚無文獻報告有關檢測ERCC1?mRNA表達量的試劑盒。

發明內容

本發明的目的在于提供一種能快速、簡便、敏感、特異的檢測ERCC1mRNA表達量的試劑盒。

本發明的試劑盒利用熒光定量PCR技術，包含ERCC1基因引物、內參基因(β-actin)引物和Taqman熒光探針：

ERCC1基因上游引物序列為：5′-GGGAATTTGGCGACGTAATTC-3′(SEQ?ID?NO：1)；

ERCC1基因下游引物序列為：5′-GCGGAGGCTGAGGAACAG-3′(SEQ?ID?NO：2)；

Taqman熒光探針：6FAM?5’-CACAGGTGCTCTGGCCCAGCACATA-3’TAMRA(SEQ?ID?NO：3)；

β-actin基因上游引物序列為：5′-TGAGCGCGGCTACAGCTT-3’(SEQ?ID?NO：4)；