[發(fā)明專利]一種熒光定量PCR技術檢測ERCC1 mRNA表達量的試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110032311.2
• 申請日: 2011-01-28
• 公開（公告）號: CN102154475A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發(fā)明（設計）人: 劉輝;劉亞莉;張敬磊;周偉平
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 上海德昭知識產權代理有限公司 31204
• 代理人: 丁振英

1.一種利用熒光定量PCR技術檢測ERCC1?mRNA表達量的試劑盒，包含ERCC1基因引物、內參基因β-actin引物和Taqman熒光探針：

ERCC1基因上游引物序列為：5′-GGGAATTTGGCGACGTAATTC-3′；

ERCC1基因下游引物序列為：5′-GCGGAGGCTGAGGAACAG-3′；

Taqman熒光探針：6FAM?5’-CACAGGTGCTCTGGCCCAGCACATA-3’TAMRA；

β-actin基因上游引物序列為：5′-TGAGCGCGGCTACAGCTT-3’；

β-actin基因下游引物序列為：5′-TCCTTAATGTCACGCACGATTT-3’；

Taqman熒光探針：6FAM?5’-ACCACCACGGCCGAGCGG-3’TAMRA。

2.根據權利要求1所述的一種利用熒光定量PCR技術檢測ERCC1?mRNA表達量的試劑盒，其特征在于該試劑盒具體包括：第一鏈cDNA合成試劑、陰性對照和陽性對照、PCR反應液和RNA提取試劑；

其中的第一鏈cDNA合成試劑為：

25mmol/L?MgCl₂?4ul，

10×逆轉錄酶緩沖液2ul，

10mmol/L?dNTP?2ul，

RNA酶抑制劑0.5ul，

Oligo(dT)₁₅?0.5ug，

AMV逆轉錄酶15U，

DEPC水；

其中陰性對照和陽性對照：以去離子水為陰性對照，以含有ERCC1總RNA樣品為陽性對照；

其中的PCR反應液包括：10×PCR?Premix、0.25pmol/ul的ERCC1基因引物和內參基因引物、0.3pmol/ul的熒光探針、2.5-4.0mM的Mgcl2、2U的Taq酶、0.2-0.4mM的dNTPs、0.2-1U的UNG酶、0.3-0.6mM?dUTP、通常取1-2ul的模板。