[發(fā)明專利]八月紅梨果實(shí)單果重主效QTL的分子標(biāo)記及其應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110031864.6
• 申請(qǐng)日: 2011-01-29
• 公開（公告）號(hào): CN102154273A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張瑞萍;張紹鈴;李秀根;吳俊;楊健
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/11
• 分類號(hào): C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責(zé)任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子遺傳育種領(lǐng)域，本發(fā)明涉及‘八月紅’梨果實(shí)單果重主效QTL的分子標(biāo)記及其應(yīng)用，可用于梨果實(shí)單果重性狀的早期分子輔助選擇，以提高育種效率。

背景技術(shù)

梨(Pyrus?L.)原產(chǎn)我國，是我國第三大果樹樹種。梨因其果實(shí)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，香甜多汁，而深受消費(fèi)者喜愛。單果重不僅是影響梨果實(shí)外觀品質(zhì)和商品性的重要因素，也是構(gòu)成梨品種產(chǎn)量和經(jīng)濟(jì)效益的重要因素之一，因此，梨果實(shí)單果重的大小對(duì)梨品種至關(guān)重要。培育具有理想單果重的品種已經(jīng)成為梨育種的重要目標(biāo)之一。

由于梨為多年生木本果樹作物，與果實(shí)品質(zhì)相關(guān)的性狀大都是由多基因控制、易受環(huán)境影響的數(shù)量性狀，在分離后代表現(xiàn)為廣泛的表型變異，其基因型與表現(xiàn)型間的對(duì)應(yīng)關(guān)系難以確定。而以往的傳統(tǒng)育種是基于經(jīng)典數(shù)量遺傳學(xué)理論，把控制某一性狀的多個(gè)基因作為整體進(jìn)行研究和選擇，在現(xiàn)有基礎(chǔ)上改良目標(biāo)性狀難度越來較大。近年來，隨著分子標(biāo)記技術(shù)的迅速發(fā)展、高密度的分子遺傳圖譜的出現(xiàn)，以及數(shù)量性狀作圖方法的不斷完善，使得數(shù)量性狀基因座(Quantitative?trait?loci，QTL)定位變成了現(xiàn)實(shí)，也為提高目標(biāo)數(shù)量性狀優(yōu)良基因型選擇的可能性、準(zhǔn)確性及預(yù)見性奠定了基礎(chǔ)。利用分子標(biāo)記定位數(shù)量性狀QTL，其實(shí)質(zhì)就是分析分子標(biāo)記與目標(biāo)性狀QTL之間的連鎖關(guān)系，即利用已知座位的分子標(biāo)記來定位未知座位的QTL，通過計(jì)算分子標(biāo)記與QTL之間的交換率，來確定QTL的具體位置?；讷@得的標(biāo)記基因型分離與數(shù)量性狀的量之間的關(guān)系，可直接把握數(shù)量性狀基因，并開發(fā)可應(yīng)用于分子標(biāo)記輔助選擇(Molecular-assisted?selection，MAS)育種的技術(shù)，這已在許多重要農(nóng)作物上取得了成功應(yīng)用。

目前有關(guān)梨數(shù)量性狀的QTL定位研究仍屬起步階段，已有的研究主要是針對(duì)一些病害或生長(zhǎng)性狀，對(duì)重要品質(zhì)性狀之一的果實(shí)單果重的QTL定位及分子標(biāo)記的研究尚沒有開展。因此，開展梨果實(shí)單果重主效基因的QTL定位，篩選緊密連鎖的分子標(biāo)記，建立雜交后代早期輔助選擇技術(shù)，對(duì)于提高梨果單果重改良效率，縮短育種進(jìn)程，節(jié)約生產(chǎn)成本顯得尤為重要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種‘八月紅’梨果實(shí)單果重主效QTL的分子標(biāo)記。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種‘八月紅’梨果實(shí)單果重主效QTL的分子標(biāo)記引物。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種‘八月紅’梨果實(shí)單果重主效QTL的分子標(biāo)記方法。

本發(fā)明的又一目的在于提供‘八月紅’梨果實(shí)單果重主效QTL的分子標(biāo)記在梨分子育種中的應(yīng)用。本發(fā)明定位梨果實(shí)單果重主效QTL，并提供與QTL位點(diǎn)緊密連鎖的分子標(biāo)記，通過檢測(cè)這些分子標(biāo)記可以預(yù)測(cè)梨果實(shí)單果重，為實(shí)現(xiàn)對(duì)該性狀的早期鑒定和篩選提供分子輔助選擇技術(shù)支持。

本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種‘八月紅’梨果實(shí)單果重主效QTL連鎖的分子標(biāo)記，是通過下列步驟篩選的：

a)利用梨品種‘八月紅’和‘碭山酥梨’雜交獲得F₁后代單株；

b)用SSR、SRAP和AFLP三種分子標(biāo)記方法分析兩個(gè)親本及其F₁群體，統(tǒng)計(jì)分析在親本間具有多態(tài)性的位點(diǎn)在后代群體中的遺傳類型，獲得多態(tài)性標(biāo)記位點(diǎn)，然后對(duì)其進(jìn)行連鎖分析，構(gòu)建了‘八月紅’梨的遺傳連鎖圖譜。對(duì)多態(tài)性標(biāo)記為點(diǎn)進(jìn)行連鎖分析時(shí)采用Jionmap3.0作圖軟件。

c)對(duì)‘八月紅’和‘碭山酥梨’雜交后代的F₁群體單株的果實(shí)單果重進(jìn)行測(cè)定，利用區(qū)間作圖法(可利用MapQTL5.0作圖軟件)，將F₁群體每個(gè)單株的果實(shí)單果重與‘八月紅’梨遺傳連鎖圖譜中的分子標(biāo)記進(jìn)行連鎖和QTL分析，以LOD值≥2.5為標(biāo)準(zhǔn)，大于2.5說明存在一個(gè)QTL位點(diǎn)，檢測(cè)到在母本‘八月紅’的第7連鎖群上檢測(cè)到單果重的QTL位點(diǎn)Pfw-1，其LOD值為4.77，是主效QTL，距離最近的一個(gè)AFLP分子標(biāo)記為EACAMCAC-2000m，大小為2000bp，距Pfw-1的距離為1.019cM，該標(biāo)記可以作為梨果實(shí)單果重的標(biāo)記，所獲得的分子標(biāo)記EACAMCAC-2000m的AFLP引物為：E-ACA：5′-GACTGCGTACCAATTCACA-3′和M-CAC：5′-GATGAGTCCTGAGTAACAC-3′。

上述的‘八月紅’梨果實(shí)單果重主效QTL的分子標(biāo)記，所述主效QTL位點(diǎn)Pfw-1位于‘八月紅’梨第3連鎖群上，其解釋30.9％的單果重特征。