[發明專利]八月紅梨果實單果重主效QTL的分子標記及其應用

無效

• 申請號: 201110031864.6
• 申請日: 2011-01-29
• 公開（公告）號: CN102154273A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發明（設計）人: 張瑞萍;張紹鈴;李秀根;吳俊;楊健
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤

1.一種‘八月紅’梨果實單果重主效QTL的分子標記，其特征在于是通過下列步驟篩選的：

(1)利用梨品種‘八月紅’和‘碭山酥梨’雜交獲得F₁后代單株；

(2)用SSR、SRAP和AFLP三種分子標記方法分析兩個親本及其F₁群體，統計分析在親本間具有多態性的位點在后代群體中的遺傳類型，獲得多態性標記位點，然后對其進行連鎖分析，構建‘八月紅’梨的遺傳連鎖圖譜。

(3)對‘八月紅’和‘碭山酥梨’雜交后代的F₁群體單株的果實單果重進行測定，利用MapQTL5.0作圖軟件的區間作圖法，將F₁群體每個單株的果實單果重與‘八月紅’梨遺傳連鎖圖譜中的分子標記進行連鎖和QTL分析，以LOD值≥2.5為標準，大于2.5說明存在一個QTL位點，檢測到在母本‘八月紅’的第7連鎖群上檢測到單果重的QTL位點Pfw-1，其LOD值為4.77，是主效QTL，距離最近的一個AFLP分子標記為EACAMCAC-2000m，大小為2000bp，距Pfw-1的距離為1.019cM，該標記可以作為梨果實單果重的標記，所獲得的分子標記EACAMCAC-2000m的AFLP引物為E-ACA：5′-GACTGCGTACCAATTCACA-3′和M-CAC：5′-GATGAGTCCTGAGTAACAC-3′。

2.根據權利要求1所述的‘八月紅’梨果實單果重主效QTL的分子標記，其特征在于：所述主效QTL位點Pfw-1位于‘八月紅’梨第3連鎖群上，其解釋30.9％的單果重特征。

3.一種‘八月紅’梨果實單果重主效QTL的AFLP分子標記引物，其特征在于該引物序列為E-ACA：5′-GACTGCGTACCAATTCACA-3′和M-CAC：5′-GATGAGTCCTGAGTAACAC-3′。

4.一種‘八月紅’梨果實單果重主效QTL的分子標記方法，其特征在于：用梨基因組DNA，限制性內切酶為EcoR?I和Mse?I，AFLP引物為E-ACA：5′-GACTGCGTACCAATTCACA-3′和M-CAC：5′-GATGAGTCCTGAGTAACAC-3′，進行PCR擴增，擴增產物在6％變性聚丙烯酰胺凝膠上電泳分離后，如果獲得一個分子標記大小為2000bp，則表明與梨果實單果重的主效QTL位點Pfw-1相連鎖的分子標記存在，Pfw-1位于‘八月紅’梨第3連鎖群上，其解釋30.9％的單果重特征。

5.權利要求1或2所述的‘八月紅’梨果實單果重主效QTL的分子標記在梨分子育種中的應用。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于：用梨基因組DNA，限制性內切酶為EcoR?I和Mse?I，AFLP引物為E-ACA：5′-GACTGCGTACCAATTCACA-3′和M-CAC：5′-GATGAGTCCTGAGTAACAC-3′，進行PCR擴增，擴增產物在6％變性聚丙烯酰胺凝膠上電泳分離后，如果獲得一個分子標記大小為2000bp，則表明存在與梨果實單果重的主效QTL位點相連鎖的分子標記，可預測該梨品種果實具有較高的單果重。