[發明專利]一種快速提取血液總核糖核酸的方法

有效

• 申請號: 201110027557.0
• 申請日: 2011-01-25
• 公開（公告）號: CN102154264A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發明（設計）人: 韓典霖;俞萍;李曉晨;孫克非
• 申請（專利權）人: 天根生化科技（北京）有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 羅文群

1.一種快速提取血液總核糖核酸的方法，其特征在于該方法包括以下各步驟：

(1)向100～400微升全血中加入快速紅細胞裂解液，加入的體積比為：全血∶紅細胞裂解液＝1∶5，顛倒混勻8～10次，得到混合物；

(2)對上述混合物進行離心分離，離心分離的轉速為7300轉/分鐘，離心分離時間為3分鐘，取出離心分離的沉淀物；

(3)在上述沉淀物中加入240微升懸浮液，研磨至沉淀完全溶解，加入200微升裂解液，混勻，再加入20微升蛋白酶K溶液，充分顛倒混勻，55℃下放置10分鐘，顛倒混勻，得到溶液；

(4)在上述溶液中加入240微升無水乙醇，混勻后轉入硅膜吸附柱中，進行吸附離心，離心吸附的轉速為12000轉/分鐘，離心吸附時間為1分鐘，倒去廢液；

(5)向步驟(4)的硅膜吸附柱中加入350微升去蛋白液，進行第一次去蛋白離心，去蛋白離心轉速為12000轉/分鐘，去蛋白離心時間為15秒，倒去廢液；

(6)向步驟(5)的硅膜吸附柱中加入活性單位為0.375Kunitz的脫氧核糖核酸酶溶液80微升，室溫下放置15分鐘后，再加入350微升去蛋白液，進行第二次去蛋白離心，去蛋白離心轉速為12000轉/分鐘，去蛋白離心時間為15秒，倒去廢液；

(7)向步驟(6)的硅膜吸附柱中加入500微升漂洗液，室溫下靜置2分鐘，進行脫鹽離心，脫鹽離心的轉速為12000轉/分鐘，脫鹽離心時間為15秒，倒去廢液；重復該步驟一次；

(8)對步驟(7)的硅膜吸附柱進行干燥離心，干燥離心的轉速為12000轉/分鐘，干燥離心時間為2分鐘，將吸附柱置于室溫下2～5分鐘，去除吸附材料中的漂洗液；

(9)在步驟(8)的硅膜吸附柱中加入30～50微升無核糖核酸酶的水，室溫下放置2分鐘后，進行洗脫離心，洗脫離心的轉速為12000轉/分鐘，洗脫離心時間為2分鐘，得到核糖核酸溶液。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于其中所述的快速紅細胞裂解液的各組分的質量為：

氯化銨????????60～100克

碳酸氫鉀??????15～20克

乙二胺四乙酸四鈉????????6～8克

十六烷基三甲基硫酸銨????5～10克

將上述各組分稱重后混合，加去離子水，得到混合液，用氫氧化鈉溶液調混合液的pH值至7.2～7.4，并使混合液體積為1000毫升。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于其中所述的懸浮液的配方為：

酒石酸鈉?????????????11.5～17.25克

鹽酸胍???????????????573～764克

乙基苯基聚乙二醇?????5～10毫升

將上述各組分量取后混合，加去離子水，并使混合液體積為1000毫升。