[發(fā)明專利]黨參內(nèi)酯分子印跡固相萃取柱的制備及應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110027123.0
• 申請日: 2011-01-25
• 公開（公告）號: CN102174138A
• 公開（公告）日: 2011-09-07
• 發(fā)明（設計）人: 尹小英;羅永明;江一帆;衷友泉
• 申請（專利權(quán)）人: 尹小英
• 主分類號: C08F212/36
• 分類號: C08F212/36;C08F226/06;C08J9/26;B01J20/26;B01J20/285;B01J20/30;B01D15/08;B01D15/22
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技術領域：

本發(fā)明專利涉及的是高分子合成及其在中藥活性成分分離中應用的技術領域，具體涉及黨參內(nèi)酯分子印跡聚合物的制備及利用該聚合物為固相萃取劑分離、純化天然產(chǎn)物中的黨參內(nèi)酯的方法。

背景技術：

(1)黨參，桔梗科植物黨參Codonopsis?pilosula(Franch.)Nannf.、素花黨參Codonopsis?pilosula?Nannf.var.modesta(Nannf.)L.T.Shen或川黨參Codonpsistangshen?Oliv.的干燥根。黨參內(nèi)酯是其主要有效成份，具有增強免疫力、擴張血管、降壓、改善微循環(huán)、增強造血功能等作用。

(2)中草藥所含成分十分復雜，既有有效成分，又有無效成分和有毒成分。為了提高中草藥的治療效果，就要盡最大限度提取有效成分，去除無效成分及有毒成分。因此，中草藥活性成分分離提取對于提高中藥制劑的內(nèi)在質(zhì)量和臨床療效都極為重要。傳統(tǒng)中藥活性成分的分離提取常采用硅膠柱、C₁₈鍵合相柱、Al₂O₃柱等利用成分的吸附系數(shù)差異實現(xiàn)分離，但最大缺點是選擇性差，富集容量低，尤其對一些結(jié)構(gòu)復雜，多手性碳原子，且含量低的活性化合物，分離提純難度大，采用這些常規(guī)分離手段往往需要反復操作，提取率極低，手性構(gòu)型可能因此改變而失活。分子印跡聚合物是為模板分子量身定做的高分子聚合物，由于其經(jīng)洗脫模板分子后，能留下在形狀、大小以及識別位點都與模板分子相匹配的空穴，該空穴能重新識別模板分。由于其兼有高效、穩(wěn)定和特異選擇性且合成價格低廉的特點，因而具有較廣泛應用前景。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的在于避免上述傳統(tǒng)提取方法技術存在的問題，建立一種基于黨參內(nèi)酯分子印跡聚合物為新型吸附分離材料，并以此作固相萃取柱的固定相從中藥粗提物中定向分離、富集、純化黨參內(nèi)酯的方法，由此可以獲得高提取率的目標成分。本發(fā)明通過以下的技術方案實現(xiàn)的，具體包括步驟如下：

1.黨參內(nèi)酯分子印跡聚合物的制備：

(1)將黨參內(nèi)酯、功能單體和交聯(lián)劑按照摩爾比1∶4∶20溶解在裝有68mL致孔劑乙腈溶液的圓底燒瓶中；

(2)再加入引發(fā)劑偶氮二異丁腈78mg后，通氮氣脫氧15min；

(3)將密封好的圓底燒瓶放入60℃的水浴中，恒溫聚合24h得到聚合物；

(4)將制得的聚合物用甲醇-冰醋酸(9∶1，V/V)混合液為萃取劑，通過索氏提取的方法洗去模板分子及沒有聚合的功能單體及交聯(lián)劑，以紫外光譜進行檢查直至檢測不到以上物質(zhì)的吸收為止，然后用甲醇除去殘留的冰醋酸；

(5)將除去模板分子的聚合物在60℃干燥2h，獲得黨參內(nèi)酯分子印跡聚合物；

(6)非印跡聚合物的制備方法，除不加入模板分子外，其余步驟同上。

2.固相萃取分離純化中藥粗提液中的黨參內(nèi)酯：

(1)固相萃取分離純化中藥粗提物中的黨參內(nèi)酯：稱取黨參藥材粉末(過50目篩)5.0g，加入甲醇提取液40mL，浸泡1h后，放入超聲波中超聲40min后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，用甲醇溶解并定容至5mL，備用；

(2)將上述得到的黨參內(nèi)酯分子印跡聚合物采用干法裝柱填充到固相萃取柱中，并用甲醇溶液平衡柱子；取黨參藥材粗提取液5mL上樣后，用甲醇洗脫保留在萃取柱中的黨參內(nèi)酯，將洗脫液收集并濃縮、干燥，即得到高純度的黨參內(nèi)酯。

本發(fā)明制備的分子印跡聚合物形貌為規(guī)則球形且單分散，粒徑5μm左右，對黨參內(nèi)酯具有很好的識別性能，作為固相萃取的填料，可用于中藥中黨參內(nèi)酯成分的高效分離、富集及純化。

與C₁₈鍵合固相萃取柱，硅膠固相萃取柱及Al₂O₃固相萃取柱相比，黨參分子印跡固相萃取柱對提取液中的黨參內(nèi)酯有更好的選擇性，柱容量最高，達到8.6μmol/g，是C₁₈鍵合固相萃取柱和硅膠固相萃取柱的2-3倍，Al₂O₃固相萃取柱的10倍。同時洗脫率達到93％，亦高于其它吸附劑固相萃取柱。

附圖說明：

附圖1為黨參內(nèi)酯分子印跡聚合物合成示意圖，表明黨參內(nèi)酯與功能單體1-乙烯基咪唑之間通過氫鍵發(fā)生分子間作用力，交聯(lián)劑在引發(fā)劑熱引發(fā)下發(fā)生聚合反應后，固定了黨參內(nèi)酯和1-乙烯基咪唑形成的復合物，洗脫模板分子后留下作用位點的空腔，得到印跡聚合物；圖2是聚合物微粒的形態(tài)電鏡掃描圖，放大6000倍，粒徑在5μm左右。

具體實施方式：