[發(fā)明專利]miR-378生物標(biāo)志物在胃癌檢測、診斷中的應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110022691.1
• 申請日: 2011-01-20
• 公開（公告）號: CN102605042A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉寒梢;孟憲欣;張偉;張春秀;肖華勝
• 申請（專利權(quán)）人: 上海生物芯片有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海浦一知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31211
• 代理人: 高月紅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種內(nèi)源性非編碼小RNA(MicroRNA，miRNA)作為生物標(biāo)志物的應(yīng)用，特別是涉及一種miR-378(miRNA-378)在胃癌檢測和診斷中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

胃癌是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，每年約有100萬個新發(fā)病例，男性胃癌的死亡率為各種腫瘤的第二位，女性則為第四位【Garcia?M?et?al.2007.Global?Cancer?Facts?&?Figures?2007[online].Accessed?Aug?20，2008.URL：www.cancer.gov】。而我國是胃癌的高發(fā)區(qū)，每年我國新發(fā)現(xiàn)40萬胃癌患者，約占世界胃癌發(fā)病人數(shù)的42％左右。由于胃癌早期癥狀不明顯，又缺乏特異的早期診斷方法【di?Mario?F?et?al.Non-invasive?tests?in?gastric?diseases.Dig?Liver?Dis?40：523-530(2008)】，現(xiàn)有的腫瘤標(biāo)志物CEA、CA19-9、CA50、CA125在胃癌中的敏感度與特異性不高，對胃癌具較高特異性的CA72-4也通常在胃癌的III-IV期增高。胃癌的明確診斷通常在疾病的進(jìn)展期才能做出，而此時病人的平均生存期只有7～9個月【W(wǎng)agner?AD?et?al.Chemotherapy?in?advanced?gastric?cancer：asystematic?review?and?meta-analysis?based?on?aggregate?data.J?Clin?Oncol.24：2903-2909(2006)】。因而尋找利于早期診斷和早期治療的生物標(biāo)志物一直是胃癌研究的熱點(diǎn)。

MicroRNA(miRNA)是在動植物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的長度約為21～25個核苷酸的非編碼RNA分子，主要通過切斷降解和翻譯抑制來完成它對靶基因的負(fù)調(diào)控【Reinhart?BJ?et?al.The?21-nucleotide?let-7?RNA?regulates?developmental?timingin?Caenorhabditis?elegans.Nature?403，901-906(2000)；Brennecke?J?et?al.Bantam?encodes?a?developmentally?regulated?microRNA?that?controls?cell?proliferation?and?regulates?the?proapoptotic?gene?hid?in?Drosophila.Cell?113，25-36(2003)；Zeng?Y?etal.Sequence?requirements?for?microRNA?processing?and?function?in?human?cells.RNA?9，112-123(2003)；Hake?S?et?al.MicroRNAs：A?role?in?plant?development.Curr.Biol.13，R851-R852(2003)】。由于它的序列、結(jié)構(gòu)、豐度和表達(dá)方式的多樣性，使其在真核基因表達(dá)調(diào)控中有著廣泛的作用。作為人類腫瘤信號通路積極的參與者，miRNA不僅扮演著原癌基因和抑癌基因的角色【Dews?M?et?al.Augmentation?of?tumor?angiogenesis?by?a?Myc-activated?microRNA?cluster.NatGenet.38，1060-1065(2006)；He?L?et?al.A?microRNA?polycistron?as?a?potential?human?oncogene.Nature?435，828-33(2005)；Bonci?D?et?al.The?miR-15a-miR-16-1cluster?controls?prostate?cancer?by?targeting?multiple?oncogenic?activities.Nat?Med.14，1271-1277(2008)】，與腫瘤的轉(zhuǎn)移凋亡也有關(guān)聯(lián)【Huang?Q?et?al.The?microRNAs?miR-373?and?miR-520c?promote?tumor?invasion?and?metastasis.Nat?Cell?Biol.10，202-210(2008)；Ma?L?et?al.Tumour?invasion?and?metastasis?initiated?by?microRNA-10b?in?breast?cancer.Nature?449，682-688(2007)；Tavazoie?SF?et?al.Endogenous?human?microRNAs?that?suppress?breast?cancer?metastasis.Nature?451，147-152(2008)】。由于不同的腫瘤顯示出特異性的miRNA表達(dá)譜【Lu?J?et?al.MicroRNA?expression?profiles?classify?human?cancers.Nature?435，834-838(2005)】，miRNA在福爾馬林固定的組織中有很高的穩(wěn)定性【Xi?Y?et?al.Systematic?analysis?of?microRNA?expression?of?RNA?extracted?from?fresh?frozen?and?formalin-fixed?paraffin-embedded?samples.RNA?13，1668-1674(2007)；Nelson?PTet?al.RAKE?and?LNA-ISH?reveal?microRNA?expression?and?localization?in?archivalhuman?brain.RNA?12，187-191(2006)】，所以越來越多的科學(xué)家提出miRNA在血清和血漿中也能有穩(wěn)定的表達(dá)，并可以作為潛在的新型腫瘤標(biāo)志物。單個miRNA能夠影響數(shù)百個蛋白質(zhì)表達(dá)，21-25個核苷酸的長度也決定了miRNA沒有復(fù)雜的結(jié)構(gòu)與修飾過程，這些特點(diǎn)都預(yù)示了miRNA作為生物學(xué)標(biāo)志的優(yōu)越性。已有研究發(fā)現(xiàn)，miR-141在包括人前列腺癌在內(nèi)的上皮細(xì)胞性腫瘤患者血清中有明顯的表達(dá)上調(diào)，提示miR-141可以作為判斷腫瘤類型的生物學(xué)標(biāo)志【Patrick?S?et?al.Circulating?microRNAs?as?stable?blood-based?markers?for?cancer?detection.PNAS.105，10513-10518(2008)】。缺乏明顯臨床癥狀及有效生物學(xué)標(biāo)志的卵巢癌患者也可以用血清miRNA檢測來提高早期診斷及早期治療的可能性。科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)并證實(shí)了miR-21，92，93，126和29a在腫瘤血清樣本中有明顯的過量表達(dá)，而miR-155，127及99b的表達(dá)卻明顯降低【Resnick?KE?et?al.The?detection?of?differentially?expressed?microRNAs?from?the?serum?of?ovarian?cancer?patients?using?a?novel?real-time?PCR?platform.Gynecol?Oncol.112，55-59(2009)；Taylor?D?et?al.MicroRNA?signatures?of?tumor-derived?exosomes?as?diagnostic?biomarkers?of?ovarian?cancer.Gynecol?Oncol.110，13-21(2008)】。此外在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤血清中miR-21的表達(dá)明顯增高，增高的miR-21還暗示了較好的無復(fù)發(fā)生存率【Lawrie?CH?et?al.Detection?of?elevated?levels?of?tumour-associated?microRNAs?in?serum?of?patients?with?diffuse?large?B-cell?lymphoma.Br?J?Haematol.141，672-5(2008)；Chin?LJ?et?al.A?truth?serum?for?cancer-microRNAs?have?major?potential?as?cancer?biomarkers.Cell?Res.18，983-984(2008)】。這一結(jié)果顯示，檢驗(yàn)miRNA的特異性表達(dá)不僅有助于腫瘤的早期診斷，還可用于病人的預(yù)后判斷。這些研究都充分證實(shí)，血清及血漿miRNA的測定是一個檢測癌癥生物學(xué)標(biāo)志物很有前途的領(lǐng)域。