[發明專利]一種MicroRNA特異表達譜及其應用

無效

• 申請號: 201110021905.3
• 申請日: 2011-01-18
• 公開（公告）號: CN102586412A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 彭志海;韓中博;樊軍衛
• 申請（專利權）人: 上海市第一人民醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

技術領域

本發明屬生物學和醫學檢驗領域，涉及一種腫瘤生物標志物及其臨床應用，具體涉及一種MicroRNA特異表達譜及其應用，所述的MicroRNA特異表達譜與肝癌肝移植術后腫瘤復發早期診斷和預后判斷相關。

背景技術

自2004年來，隨著對腫瘤分子標志物研究的不斷進展，microRNA成為當今分子標志物研究的熱點。現有技術公開了MicroRNAs(miRNAs)是一種約21-23個堿基的單鏈小分子RNA，是由具有發夾結構的約70-90個堿基大小的單鏈RNA前體經過Dicer酶加工后生成，不同于siRNA(雙鏈)但是與siRNA密切相關。據推測，這些非編碼小分子RNA(miRNAs)參與調控基因表達，但其機制區別于siRNA介導的mRNA降解。第一個被確認的miRNA是在線蟲中首次發現的lin-4和let-7，隨后多個研究小組在包括人類、果蠅、植物等多種生物物種中鑒別出數百個miRNAs。有越來越多的證據表明，miRNAs在腫瘤的診斷，腫瘤生物學行為以及預后的判斷方面有著巨大的應用潛力。

生物芯片技術是通過微縮技術，根據分子間特異性地相互作用的原理，將生命科學領域中不連續的分析過程集成于硅芯片或玻璃芯片表面的微型生物化學分析系統，以實現對細胞、蛋白質、基因及其他生物組分的準確、快速、大信息量的檢測；它的出現給生命科學、醫學、化學、新藥研發、生物武器戰爭、司法鑒定、食品與環境監督等眾多領域帶來巨大的革新甚至革命。按照芯片上固化的生物材料的不同，可將生物芯片劃分成為基因芯片、蛋白質芯片、細胞芯片和組織芯片。目前，最成功的生物芯片形式是以基因序列為分析對象的“微陣列(microarray)”，也被稱為基因芯片(genechip)多DNA芯片(DNAchip)。

microRNA芯片隨著研究者對miRNAs的研究的不斷深入，而逐漸成為對miRNAs研究的有力的輔助工具。丹麥Exiqon公司基于LNA^TM專利技術，開發出一系列microRNA研究工具，其基于LNA^TM專利技術捕獲探針的microRNA芯片，具有高靈敏度，搞特異性，Tm值均一化，雜交溫度高，統一標記方法，節約樣品用量，無需純化樣品等特性，是microRNA高通量研究的有力輔助工具。

目前臨床上常常無法做到對腫瘤的早期發現、早期診斷和早期治療，往往會延誤治療的最佳時機。據統計，原發性肝癌在我國惡性腫瘤發病率中排第5位，占惡性腫瘤死亡原因的第3位。肝切除曾經是治療肝癌的主要方法，但是在我國肝癌患者中80％以上的患者有不同程度的肝硬化，而在這些患者中能夠行肝切除治療的患者僅占10％-15％。其余的患者由于腫瘤的大小，位置以及潛在肝硬化的嚴重程度等因素而無法實行肝切除術。隨著近年來肝移植術的不斷發展和成熟，以及在國際公認肝移植標準的篩選下，肝移植術已經成為肝癌的一種有效的治療方法。但是腫瘤的復發是影響受者長期存活的主要因素。目前在國際上常用的肝癌肝移植受者選擇標準主要包括米蘭標準和UCSF標準。Mazzaferro等在1996年首次提出米蘭標準：①單一癌灶直徑≤5cm；②癌灶≤3個，每個直徑≤3cm；③無肝內大血管浸潤和肝外轉移。符合米蘭標準的肝癌受者肝移植術后4年生存率為85％，不符合米蘭標準者肝移植術后4年生存率為50％。2001年，Yao等提出了UCSF(University?of?California，San?Froncisco)標準：①單一癌灶直徑≤6.5cm；②癌灶≤3個，每個直徑≤4.5cm，累計直徑≤8cm；③無肝內大血管浸潤和肝外轉移。符合UCSF標準的肝癌受者肝移植術后1年、5年生存率分別為90％、75％，不符UCSF標準者肝移植術后1年生存率為50％。但是為什么在這些肝移植準入標準的嚴格篩選下，仍有一定比例的病人術后腫瘤復發，我們不得而知。縱觀目前主要的肝癌肝移植準入標準，都著重于腫瘤大體形態學指標，很少涉及基因及蛋白分子等實驗室檢查指標，不可避免地使得對于腫瘤生物學行為的評估及預后的預測片面化。

所以，探討肝癌復發轉移相關的分子機制、尋找預警復發轉移的靶分子，可為臨床防治肝癌移植術后復發轉移提供理論依據，具有現實的社會需求和重要的科學意義。

發明內容

本發明目的是提供涉及一種腫瘤生物標志物及其臨床應用，具體涉及一種MicroRNA特異表達譜及其應用，所述的MicroRNA特異表達譜是高敏感度、高特異性的新的肝癌肝移植術后腫瘤復發早期診斷及預后判斷相關的一組特異性MicroRNA表達譜，能為肝癌肝移植術后腫瘤復發的早期診斷及預后判斷提供參考依據。