[發明專利]一種污水急性生物毒性的檢測方法

無效

• 申請號: 201110021294.2
• 申請日: 2011-01-19
• 公開（公告）號: CN102175606A
• 公開（公告）日: 2011-09-07
• 發明（設計）人: 劉永軍;馬曉妍;王曉昌;張愛寧
• 申請（專利權）人: 西安建筑科技大學
• 主分類號: G01N21/00
• 分類號: G01N21/00;G01N33/18;C12Q1/18
• 代理公司: 西安恒泰知識產權代理事務所 61216
• 代理人: 王彩花

技術領域

本發明屬于環境水體的檢測方法領域，具體涉及一種污水急性生物毒性的檢測方法。

背景技術

污水急性生物毒性檢測方法主要有：魚類急性毒性實驗、水蚤類毒性實驗、藻類毒性實驗、微生物毒性實驗等。其中，微生物毒性實驗多采用發光細菌法，因其檢測時間短、費用低，對實驗條件和試驗場地要求也較低，已得到廣泛的應用。

然而，對天然水樣直接進行發光細菌毒性試驗常會因水體中存在一些可刺激發光細菌發光、生長的“非毒性”共存物質，而導致檢測結果不穩定，重現性差。例如對NH₃-N或PO₄-P含量高的水體，由于其可刺激細菌發光或可作為細菌營養物質的作用掩蓋了多種有機污染物的毒性，可能會低估一些物質的毒性，進而導致試驗結果誤差較大，重復性差。?除此之外，現有的方法對于檢測過程中樣品和菌種的具體用量沒有明確規定，導致了檢測結果存在不確定性，難以精確定量表述。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種污水急性生物毒性的檢測方法，該方法通過對污水樣品進行萃取和濃縮處理，排除無機成分的干擾，從而能利用淡水發光細菌——青海弧菌Q67進行定量檢測，保證檢測結果準確、穩定、重現性好。

為實現上述任務，本發明采取如下的技術解決方案：

一種污水急性生物毒性的檢測方法，其特征在于，所述方法按下列步驟進行：

步驟一，樣品處理：

按照標準取樣方法采取污水樣，并對樣品進行如下處理：

（1）依次將7?mL的二氯甲烷、7?mL的甲醇、7?mL的純水通過C18固相萃取小柱對柱子進行潤濕活化；

（2）取500?mL經0.45?μm濾膜過濾后的污水樣上柱，使污水樣連續通過C18固相萃取小柱，并調節真空泵使流出液流速為3mL/min；

（3）待污水樣全部流出柱后用5?mL純水過洗柱子，接著繼續真空抽氣干燥15?min，而后將C18固相萃取小柱放入離心機中離心；

（4）用二氯甲烷洗脫柱子，收集洗脫液，并將所得洗脫液用高純氮氣吹干，然后用5mL體積分數為0.5%?的二甲基亞砜溶解所得吹干物，得到濃縮樣品溶液；

（5）將濃縮樣品溶液用0.9%的生理鹽水配制成一系列濃度梯度的待檢測樣品溶液；

步驟二，青海弧菌Q67菌懸液的制備：

（1）?將青海弧菌Q67菌種轉接到50?mL液體培養基中，22℃條件下，培養10～12?h；

（2）?將得到的菌體培養液在12000?rmp?條件下離心10?min?后棄去上清液，接著對沉淀的菌體細胞進行3次洗滌：即用10?mL質量分數為0.9%的生理鹽水重懸、12000?rmp?離心10?min，然后將經洗滌的菌體細胞用10?mL?0.9%的生理鹽水重懸，得到青海弧菌Q67菌懸液；

步驟三，污水樣急性生物毒性的檢測：

對步驟一中所得到的每個待檢測樣品溶液進行如下檢測：

（1）?在1.5?mL樣品檢測管中加入100?μL待檢測樣品溶液，并取100?μL??0.9%的生理鹽水加入1.5?mL對照檢測管中作為空白對照樣，其中樣品及空白對照樣均有3~5個平行樣；

（2）上述各檢測管中分別加入100?μL青海弧菌Q67菌懸液，且各檢測管之間加菌懸液的時間間隔為15?s；

（3）菌懸液加入完900?s后，采用發光細菌檢測儀，按照加青海弧菌Q67菌懸液的檢測管的順序，依次對各樣品及對照樣進行發光強度檢測，讀取其相對發光值；

步驟四，結果計算：

（1）?計算出對照樣的相對發光值平均值I₀和不同濃度待檢測樣品的相對發光值平均值I，按（式A）計算出不同濃度待檢測樣品對發光細菌的相對抑制率E；

（式A）

（2）以待檢測樣品的濃度為縱坐標，以不同濃度待檢測樣品的相對抑制率E為橫坐標作定量標準曲線，并從該曲線上讀取出相對抑制率為50%時所對應的濃度，即半數發光抑制率濃度EC₅₀，EC₅₀值越大，毒性越小；

（3）用（式B）計算總影響指數TII₅₀，并以此來反映污水樣品的生物毒性，TII_50?值越大，毒性越大。

（式B）