[發(fā)明專利]一種污水急性生物毒性的檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110021294.2
• 申請日: 2011-01-19
• 公開（公告）號: CN102175606A
• 公開（公告）日: 2011-09-07
• 發(fā)明（設計）人: 劉永軍;馬曉妍;王曉昌;張愛寧
• 申請（專利權）人: 西安建筑科技大學
• 主分類號: G01N21/00
• 分類號: G01N21/00;G01N33/18;C12Q1/18
• 代理公司: 西安恒泰知識產(chǎn)權代理事務所 61216
• 代理人: 王彩花

1.一種污水急性生物毒性的檢測方法，其特征在于，該方法按下列步驟進行：

步驟一，樣品處理：

按照標準取樣方法采取污水樣，并對樣品進行如下處理：

（1）依次將7mL的二氯甲烷、7?mL的甲醇、7mL的純水通過C18固相萃取小柱對柱子進行潤濕活化；

（2）取500?mL經(jīng)0.45?μm濾膜過濾后的污水樣上柱，使污水樣連續(xù)通過C18固相萃取小柱，并調(diào)節(jié)真空泵使流出液流速為3mL/min；

（3）待污水樣全部流出柱后用5?mL純水過洗柱子，接著繼續(xù)真空抽氣干燥15?min，而后將C18固相萃取小柱放入離心機中離心；

（4）用二氯甲烷洗脫柱子，收集洗脫液，并將所得洗脫液用高純氮氣吹干，然后用5mL體積分數(shù)為0.5%的二甲基亞砜溶解所得吹干物，得到濃縮樣品溶液；

（5）將濃縮樣品溶液用0.9%的生理鹽水配制成系列濃度梯度的待檢測樣品溶液；

步驟二，青海弧菌Q67菌懸液的制備：

（1）將青海弧菌Q67菌種轉(zhuǎn)接到50?mL液體培養(yǎng)基中，22℃條件下，培養(yǎng)10～12?h；

（2）將得到的菌體培養(yǎng)液在12000?rmp?條件下離心10?min?后棄去上清液，接著對沉淀的菌體細胞進行3次洗滌：即用10?mL?0.9%的生理鹽水重懸、12000?rmp?離心10?min，然后將經(jīng)洗滌的菌體細胞用10?mL?0.9%的生理鹽水重懸，得到青海弧菌Q67菌懸液；

步驟三，污水樣急性生物毒性的檢測：

對步驟一中所得到的每個待檢測樣品溶液進行如下檢測：

（1）?在1.5?mL樣品檢測管中加入100?μL待檢測樣品溶液，并取100?μL?0.9%的生理鹽水加入1.5?mL對照檢測管中作為空白對照樣，其中樣品及空白對照樣均有3~5個平行樣；

（2）上述各檢測管中分別加入100?μL青海弧菌Q67菌懸液，且各檢測管之間加菌懸液的時間間隔為15?s；

（3）菌懸液加入完900?s后，采用發(fā)光細菌檢測儀，按照加青海弧菌Q67菌懸液的檢測管的順序，依次對各樣品及對照樣進行發(fā)光強度檢測，讀取其相對發(fā)光值；

步驟四，結果計算：

（1）?計算出對照樣的相對發(fā)光值平均值I₀和不同濃度待檢測樣品的相對發(fā)光值平均值I，按（式A）計算出不同濃度待檢測樣品對發(fā)光細菌的相對抑制率E；

（式A）

（2）以待檢測樣品的濃度為縱坐標，以不同濃度待檢測樣品的相對抑制率E為橫坐標作定量標準曲線，并從該曲線上讀取出相對抑制率為50%時所對應的濃度，即半數(shù)發(fā)光抑制率濃度EC₅₀，EC₅₀值越大，毒性越小；

（3）用（式B）計算總影響指數(shù)TII₅₀，并以此來反映污水樣品的生物毒性，TII_50?值越大，毒性越大；

（式B）。

2.如權利要求1所述的污水急性生物毒性的檢測方法，其特征在于，步驟二中所述的液體培養(yǎng)基中各成分相對于蒸餾水質(zhì)量的質(zhì)量分數(shù)為：胰胨：0.5%、酵母膏：0.5%、甘油：0.3%、MgCl₂：0.32%、KBr：0.02%、CaSO₄：0.01%、NaCl?：0.4%、KCl：0.4%，pH?為8.5±0.5。