[發(fā)明專利]植物樣品中果膠含量的測(cè)定方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110007055.1
• 申請(qǐng)日: 2011-01-13
• 公開（公告）號(hào): CN102033050A
• 公開（公告）日: 2011-04-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孔浩輝;黃翼飛;金保鋒
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東中煙工業(yè)有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): G01N21/31
• 分類號(hào): G01N21/31;G01N21/33;G01N21/78;G01N5/04;G01N1/44;G01N1/34
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 曹志霞;李贊堅(jiān)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物組分的提取，尤其涉及一種植物樣品中果膠含量的測(cè)定方法。

背景技術(shù)

在植物中果膠含量的測(cè)定中，常需用到顯色法檢測(cè)，但在顯色法檢測(cè)時(shí)，由于色素會(huì)有一定吸光度，從而對(duì)顯色法造成干擾，同時(shí)糖會(huì)與顯色劑反應(yīng)形成有色物質(zhì)，這也會(huì)對(duì)顯色法造成干擾，所以在測(cè)定過(guò)程中，通常都需要先進(jìn)行除糖、除色素的前處理。在植物中果膠含量的測(cè)定中，常用的樣品前處理方法是：將植物粉末樣品用濃度為80％的乙醇溶液加熱回流1小時(shí)，去除濾液，余下濾渣再做進(jìn)一步的提取處理，用于其它檢測(cè)，此種方法一般稱為乙醇處理法，但這種乙醇處理法存在的問題是：只能除去小分子水溶性糖，同時(shí)對(duì)色素的提取也有一定局限性。而在濾渣處理時(shí)，有時(shí)候需要用酸液提取，這就造成之前來(lái)被提取出來(lái)的多糖水解而被提取出來(lái)，而由于酸的作用破壞了細(xì)胞壁，使之前來(lái)能溶解出來(lái)的色素也被提取出來(lái)，從而影響最終檢測(cè)結(jié)果。在進(jìn)行完前處理后，要對(duì)經(jīng)過(guò)前處理的樣品進(jìn)行檢測(cè)。現(xiàn)有的檢測(cè)方法有重量法，由于果膠不是單純半乳糖醛酸的聚合，在采用重量法檢測(cè)時(shí)，支鏈上的中性糖和α-L-(1→2)鼠李糖，以及甲酯化基團(tuán)、乙酰化基團(tuán)同時(shí)被沉淀下來(lái)，所以其重量必然高于對(duì)半乳糖醛酸累計(jì)量。因此，重量法檢測(cè)結(jié)果無(wú)法反映出樣品中的半乳糖醛酸含量情況，即無(wú)法反映出樣品中表征果膠特性的半乳糖醛酸支鏈骨架的含量情況。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，提供一種植物樣品中果膠含量的測(cè)定方法，檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確。

本發(fā)明提供的一種植物樣品中果膠含量的測(cè)定方法，包括如下步驟：

1)在植物樣品中加入酸性醇溶液，隨后在水浴中加熱回流，再進(jìn)行一次過(guò)濾；

2)將一次過(guò)濾得到的濾渣用酸溶液浸泡，并在水浴中加熱回流，再進(jìn)行二次過(guò)濾，冷卻后定容，得到濾液待用；

3)往二次過(guò)濾后的濾渣加入乙酸/乙酸鈉緩沖溶液處理，再加入果膠酶溶液，在水浴中加熱振蕩，然后進(jìn)行三次過(guò)濾，得到濾液待用；

4)將步驟2)中得到的濾液依次加入乙酸/乙酸鈉緩沖溶液、果膠酶溶液，然后在水浴中加熱振蕩，得到酶解液，在酶解液中合并步驟3)得到的濾液，定容，得到待測(cè)液；

5)將待測(cè)液吸入到連續(xù)流動(dòng)分析儀中，所述待測(cè)液與吸入到連續(xù)流動(dòng)分析儀中的強(qiáng)酸性分解試劑反應(yīng)，分解成糠醛堿的衍生物，而后與加入的顯色劑反應(yīng)顯色，在490nm～540nm波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè)。

優(yōu)選地，步驟1)中，以體積百分比計(jì)，酸性醇溶液的醇濃度為60％～80％；而氫離子濃度為0.005mol/L～0.02mol/L，酸性醇溶液加入量為：1克樣品加入約50～200mL酸性醇溶液。

優(yōu)選地，步驟1)中，所述水浴中加熱回流的溫度為：80℃～100℃，時(shí)間為10分鐘～1小時(shí)。

優(yōu)選地，所述酸溶液是濃度為0.05mol/L～0.1mol/L的鹽酸，水浴中加熱回流的溫度為：80℃～100℃，時(shí)間為30分鐘～2小時(shí)，對(duì)于1克植物樣品，定容后濾液體積控制在200mL～250mL。

優(yōu)選地，乙酸/乙酸鈉緩沖液和果膠酶溶液加入量為：1克植物樣品，加入緩沖液15mL～20mL、加入果膠酶溶液1mL～2mL，其中，每毫升果膠酶溶液的酶活性300個(gè)酶活力單位以上；所述水浴中加熱振蕩的溫度為：40℃～60℃，時(shí)間為1小時(shí)～2小時(shí)。

優(yōu)選地，1mL濾液中加入緩沖液15～20mL、加入果膠酶溶液1～2mL，其中，每毫升果膠酶溶液的酶活性為300個(gè)酶活力單位以上，所述水浴中加熱振蕩的溫度為：40℃～60℃，時(shí)間為1小時(shí)～2小時(shí)。

優(yōu)選地，步驟5)中將待測(cè)液與強(qiáng)酸性分解試劑通過(guò)螺旋管混合，在待測(cè)液與強(qiáng)酸性分解試劑反應(yīng)過(guò)程中加熱，而后冷卻。

優(yōu)選地，所述植物樣品為粉末狀。

優(yōu)選地，步驟1)中，所述植物樣品體積較大時(shí)，加入酸性醇溶液后先攪拌成槳，再進(jìn)行水浴加熱回流。

優(yōu)選地，所述顯色劑為對(duì)羥基聯(lián)苯溶液，所述對(duì)羥基聯(lián)苯溶液中的各組分配比為：1000mL蒸餾水中溶解300mg～500mg對(duì)羥基聯(lián)苯及3g～5g氫氧化鈉。

優(yōu)選地，所述強(qiáng)酸性分解試劑為含有四硼酸鈉的濃硫酸溶液，其中，四硼酸鈉與濃硫酸的配比為：1000mL濃度為92％～99％的濃硫酸中溶解3g～6g的四硼酸鈉。

優(yōu)選地，在待測(cè)液與強(qiáng)酸性分解試劑反應(yīng)過(guò)程中加熱的溫度為90℃～99℃。

優(yōu)選地，冷卻采用匝數(shù)為20匝～50匝的冷卻管冷卻。

優(yōu)選地，以體積百分比計(jì)，步驟3)、步驟4)中的果膠酶溶液的濃度為300u/mL～600u/mL。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：