[發明專利]巢式共擴增聚合酶鏈式反應試劑盒

有效

• 申請號: 201110004921.1
• 申請日: 2011-01-12
• 公開（公告）號: CN102146447A
• 公開（公告）日: 2011-08-10
• 發明（設計）人: 夏慶杰;劉欽松
• 申請（專利權）人: 山東博奧克生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種操作簡單、特異性高、每個循環特異性擴增效率可以超過2倍的DNA體外擴增技術，即巢式共擴增聚合酶鏈式反應試劑盒，其英文名稱是nest?coamplific?ation?polymerasechain?reaction，英文縮寫是NCA-PCR；首先根據待擴增靶DNA序列合成一對特異的外側引物和一對特殊的巢式引物，然后將內側與外側引物放入同一個含有耐熱DNA聚合酶、dNTPs、模板DNA、鎂離子、聚合酶鏈式反應緩沖液、超純水等組成的擴增緩沖反應體系中，在熱循環儀上進行高溫、低溫、中溫的反復熱循環，使內外側引物同時引導新鏈合成，獲得分別由內內、外外、內外側引物界定的聚合酶鏈式反應產物；其特征在于每一循環中合成的由外外、內外側引物界定的聚合酶鏈式反應產物，都可以作為內內引物擴增附加的模板，使內內引物引導的聚合酶鏈式反應產物以每個熱循環超過2倍的速度增加，經過n個循環，內內引物引導的聚合酶鏈式反應產物理論值即擴增為初始模板量的1/4(n²+3n)2ⁿ倍。

2.根據權利要求1所述的一種巢式共擴增聚合酶鏈式反應試劑盒，其特征在于，所述的擴增緩沖反應體系中各成分及其濃度含量分別如下：內外側特異的引物各0.2-0.4umol/L、TaqDNA聚合酶1-3U/50ul、dNTPs底物0.2-0.5mmol/L、模板DNA若干、Mg++1.5-3.5mmol/L、緩沖液1-1.5XPCR；其中1XPCR緩沖液包括50mmol/L?KCl、10mmol/L?Tris、HCl?PH8.3、0.01％明膠。

3.根據權利要求1所述的一種巢式共擴增聚合酶鏈式反應試劑盒，其特征在于，根據該技術要求所組裝的巢式共擴增聚合酶鏈式反應試劑盒。