[發明專利]一種菜籽生物活性肽的制備方法

有效

• 申請號: 201110004821.9
• 申請日: 2011-01-12
• 公開（公告）號: CN102174627A
• 公開（公告）日: 2011-09-07
• 發明（設計）人: 陳燕飛;亓培實;何東平;劉良忠;何莉萍;江思佳;黃迪惠;倪倩;劉雪姣;宋洋
• 申請（專利權）人: 武漢百信食品有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K4/10;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/14
• 代理公司: 北京捷誠信通專利事務所(普通合伙) 11221
• 代理人: 魏殿紳;龐炳良

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及利用菜籽粕為原料，采用蛋白酶水解工藝，制備菜籽生物活性肽的方法。

背景技術

菜籽中含有20％～25％的蛋白質，脫脂后的菜籽粕中含有32％～40％的蛋白質。菜籽蛋白主要是由高相對分子質量的12S蛋白和低相對分子質量的2S蛋白組成，菜籽蛋白是一種優質蛋白質，其氨基酸組成符合FAO/WHO推薦模式值，PER值高于其它的植物蛋白，甚至高于酪蛋白，最大特點是含硫氨基酸和賴氨酸的含量較高。菜籽蛋白除了具有較好的營養特性外，其功能性也優于其它蛋白，特別是吸油性、保水性和乳化性能優于其它蛋白。菜籽蛋白的酶水解是一種不完全、不徹底的水解，其產物主要是生物活性肽。菜籽生物活性肽除了具有菜籽蛋白的優點以外，還具有比菜籽蛋白和氨基酸更容易被小腸吸收，并且比菜籽蛋白質和氨基酸具有更多的生理活性。

現有菜籽生物活性肽的制備工藝主要有三種：(1)基因工程方法；(2)化學合成方法；(3)酶解法。其中，酶解法具有投資少，操作簡單，產品含量高等優點。現有利用酶解法制備菜籽肽的技術中，酶解過程中均加入大量堿液或酸液來調節酶解反應時溶液的酸堿度，且工藝中沒有脫鹽處理，使成品鹽分含量過高；而且，酶解液中含有大量色素類成分，影響成品的色澤。另外，由于酶解條件的不同，酶解后產物的分子量大小分布不均勻，影響了產品的生理活性。

發明內容

本發明的目的是為了提供一種將菜籽粕作為原料，制備菜籽生物活性肽的方法。

為達到上述目的，本發明提供的菜籽生物活性肽的制備方法：以脫脂菜籽粕為原料，先用堿溶酸沉法制備菜籽蛋白，而后添加蛋白酶水解蛋白質，依次經過活性炭脫色、超濾分級、陰陽離子交換樹脂脫鹽，最后經濃縮、噴霧干燥或冷凍干燥得到菜籽生物活性肽。

本發明的制備菜籽生物活性肽的方法，包括如下步驟：

一種菜籽生物活性肽的制備方法，該方法包括如下步驟：

(1)將脫脂菜籽粕與水按1∶5～1∶15(質量比)溶解至水中，用膠體磨粉碎，用NaOH試劑調節pH至9.0～13.0，不停攪拌15min，3000～4000rpm，15min，離心取上清液；

(2)將步驟1的上清液加熱至70～90℃，用檸檬酸調節pH值至3.0～5.0，溫度40～60℃，攪拌速度30～50r/min，使蛋白質沉淀15～45min，然后3000r/min離心分離5～15min，去除上層清液，收集固相，重新按以上步驟加水混勻，使蛋白質在等電點沉淀，重復三次，最后水洗兩次，離心得固相，即得為菜籽蛋白；

(3)將步驟2的菜籽蛋白與水按1∶5～1∶15(質量比)溶解至水中，加熱至80～95℃，保持15～30min，然后冷卻至35～50℃，用NaOH試劑調節并保持pH在6.0～8.0，按E/S比為3.0％～5.0％加入中性蛋白酶As1.398，酶解2～4h，酶解過程中用NaOH試劑調節并保持pH在6.0～8.0，不斷攪拌；

(4)待酶解結束后，用檸檬酸調節pH值至3.0～5.0，3000～4000rpm，15min，離心取上清液，為菜籽肽粗制液；

(5)在上清液加入占菜籽蛋白質量比為3％～5％的活性炭，用攪拌器攪拌2～3h，用真空抽濾將活性炭除掉；

(6)將步驟5所得的菜籽肽脫色液注入儲槽中，溶液經微濾后通過分子量截留量為1000Da超濾膜，溶液中的小分子物質經中空纖維膜的內壁滲透出來成為超濾液，收集超濾液，為菜籽肽超濾液；溶液中的蛋白等大分子物質得以保留并得到濃縮，將濃縮液回收至步驟3中再次酶解；

(7)交換樹脂于去離子水中浸泡處理24小時后裝柱，然后分別用7.5％鹽酸和10％NaOH對其進行浸泡，轉化為H⁺型陽離子交換樹脂和OH^-型陰離子交換樹脂，再用去離子水清洗至pH為7.0待用；

將步驟6中所得的菜籽肽超濾液，以5～10倍柱體積/h的流速通過H⁺型陽離子交換樹脂來脫除陽離子，待流出液pH＝4.0左右時停止加樣，之后將此流出液以同樣流速通過OH^-型陰離子交換樹脂來脫除陰離子，至流出液呈pH為7.0時停止加樣，收集為菜籽肽精制液；

(8)由步驟7中得到的菜籽肽精制液，減壓濃縮至固型物含量20％～30％；

(9)精制的菜籽肽液濃縮后，經噴霧干燥或冷凍干燥制成干粉。

本發明與現有技術相比，具有如下優點和效果：