[發明專利]一種菜籽生物活性肽的制備方法

有效

• 申請號: 201110004821.9
• 申請日: 2011-01-12
• 公開（公告）號: CN102174627A
• 公開（公告）日: 2011-09-07
• 發明（設計）人: 陳燕飛;亓培實;何東平;劉良忠;何莉萍;江思佳;黃迪惠;倪倩;劉雪姣;宋洋
• 申請（專利權）人: 武漢百信食品有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K4/10;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/14
• 代理公司: 北京捷誠信通專利事務所(普通合伙) 11221
• 代理人: 魏殿紳;龐炳良

1.一種菜籽生物活性肽的制備方法，該方法包括如下步驟：

(1)將脫脂菜籽粕與水按1∶5～1∶15(質量比)溶解至水中，用膠體磨粉碎，用NaOH試劑調節pH至9.0～13.0，不停攪拌15min，3000～4000rpm，15min，離心取上清液；

(2)將步驟1的上清液加熱至70～90℃，用檸檬酸調節pH值至3.0～5.0，溫度40～60℃，攪拌速度30～50r/min，使蛋白質沉淀15～45min，然后3000r/min離心分離5～15min，去除上層清液，收集固相，重新按以上步驟加水混勻，使蛋白質在等電點沉淀，重復三次，最后水洗兩次，離心得固相，即得為菜籽蛋白；

(3)將步驟2的菜籽蛋白與水按1∶5～1∶15(質量比)溶解至水中，加熱至80～95℃，保持15～30min，然后冷卻至35～50℃，用NaOH試劑調節并保持pH在6.0～8.0，按E/S比為3.0％～5.0％加入中性蛋白酶As1.398，酶解2～4h，酶解過程中用NaOH試劑調節并保持pH在6.0～8.0，不斷攪拌；

(4)待酶解結束后，用檸檬酸調節pH值至3.0～5.0，3000～4000rpm，15min，離心取上清液，為菜籽肽粗制液；

(5)在上清液加入占菜籽蛋白質量比為3％～5％的活性炭，用攪拌器攪拌2～3h，用真空抽濾將活性炭除掉；

(6)將步驟5所得的菜籽肽脫色液注入儲槽中，溶液經微濾后通過分子量截留量為1000Da超濾膜，溶液中的小分子物質經中空纖維膜的內壁滲透出來成為超濾液，收集超濾液，為菜籽肽超濾液；溶液中的蛋白等大分子物質得以保留并得到濃縮，將濃縮液回收至步驟3中再次酶解；

(7)交換樹脂于去離子水中浸泡處理24小時后裝柱，然后分別用7.5％鹽酸和10％NaOH對其進行浸泡，轉化為H⁺型陽離子交換樹脂和OH^-型陰離子交換樹脂，再用去離子水清洗至pH為7.0待用；

將步驟6中所得的菜籽肽超濾液，以5～10倍柱體積/h的流速通過H⁺型陽離子交換樹脂來脫除陽離子，待流出液pH＝4.0左右時停止加樣，之后將此流出液以同樣流速通過OH^-型陰離子交換樹脂來脫除陰離子，至流出液呈pH為7.0時停止加樣，收集為菜籽肽精制液；

(7)由步驟7中得到的菜籽肽精制液，減壓濃縮至固型物含量20％～30％；

(9)精制的菜籽肽液濃縮后，經噴霧干燥或冷凍干燥制成干粉。