[發明專利]匐枝青蘚配子體離體快繁方法

無效

• 申請號: 201110004042.9
• 申請日: 2011-01-11
• 公開（公告）號: CN102144545A
• 公開（公告）日: 2011-08-10
• 發明（設計）人: 婁玉霞;曹同;郭水良
• 申請（專利權）人: 上海師范大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227
• 代理人: 楊杰民

技術領域

本發明涉及一種匐枝青蘚培養技術，具體地說是一種匐枝青蘚配子體離體快繁方法。

背景技術

匐枝青蘚(Brachythecium?procumbens(mitt.)jaeg.)苔蘚植物，青蘚科(Brachytheciaceae)青蘚屬(Brachythecium)；雌雄同株，植株黃綠色，體形緊密，有光澤。主莖匍匐，彎曲，不規則斜生枝，枝單一或再分枝。葉密生，覆瓦狀排列，直立伸展；莖葉闊卵形，內凹，具皺褶；葉尖具短毛尖，中肋達葉長度的2/3-3/4。孢子體生于主莖；雌苞葉狹長，直立，先端反卷。蒴柄扭曲，平滑，長約2mm。

苔蘚植物結構簡單，對環境污染物吸附力強。已有技術表明，苔蘚類植物對重金屬、空氣和環境污染物等因子的反應敏感程度是種子植物的10倍，苔蘚植物積累的元素遠遠超過生理需要水平。即使有毒物質在環境中存在濃度很低，苔蘚植物也可以將其吸附、積累和集中在植物體內。由于對空氣污染物敏感等優點苔蘚植物被國際公認為環境污染指示生物。

利用苔蘚植物監測和研究環境重金屬的沉降污染是國際環境科學研究的重要技術問題。我國主要是通過分析苔蘚樣品組織內的元素含量，針對點污染源對大氣污染進行定量分析，對城市等大范圍地區的大氣污染進行長期的定量監測。

匐枝青蘚(Brachythecium?procumbens(mitt.)jaeg.)植株體積大，分布廣泛，易于采集，利用其指示環境污染具有明顯優勢。通過組織培養方法，建立匐枝青蘚快繁系統，可以為利用匐枝青蘚研究大氣重金屬元素在苔蘚植物體內的遷移、分布和富集機制提供理想的試驗材料。經檢索國內外專利文獻，廣泛查閱國內外出版物，未見有匐枝青蘚在試管內大量擴繁配子體的培養技術，未見有利用匐枝青蘚配子體離體培養獲得配子體的相關研究報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種離體快繁匐枝青蘚配子體的方法，實現人工大量快速擴繁匐枝青蘚，為研究苔蘚植物對環境污染的生理響應和污染物在苔蘚植物體內的遷移、分布和富集機制提供理想的試驗材料。

本發明目的是這樣實現的：

一種匐枝青蘚配子體離體快繁方法，步驟如下：

(1)準確稱取下列物質，置入容器中混合、攪拌，制備培養基：

KNO₃?250mg/L、MgSO₄·7H₂O?250mg/L、KH₂PO₄?250mg/L、Ca(NO₃)₂·4H₂O?1000mg/L、酒石酸氨0.115mg/L、NaFe-EDTA?36.7mg/L、MnSO₄·4H₂O?11.15mg/L、H₃BO₃?3.1mg/L、KI?0.415mg/L、ZnSO₄·7H₂O4.3mg/L、CuSO₄·5H₂O?0.0125mg/L、NaMoO₄·2H₂O?0.125mg/L、CoCL₂·6H₂O0.0125mg/L；

(2)培養無菌配子體：

取自然環境中生長的匐枝青蘚配子體新生分枝表面消毒，接種到步驟(1)制備的培養基上，培養條件：溫度25±2℃；光照強度4000lx；光照時間12小時/天；培養10天，篩選獲得無菌配子體；

(3)培養新生配子體分枝：

A制備新生配子體培養基：

步驟(1)制備的培養基+0.1～2.0mg/L?6-芐氨基嘌呤+0.01～0.2mg/L萘乙酸+10g/L蔗糖，置入容器中混合、攪拌，制成；

B將步驟(2)培養的無菌配子體轉接到新生配子體培養基，培養條件：溫度20-35±2℃；光照強度4000lx；光照時間12小時/天；培養30天，獲得新生配子體分枝；

(4)配子體增殖擴繁：

A制備配子體增殖擴繁培養基：

步驟(1)制備的培養基+0～0.5mg/L?6-芐氨基嘌呤+0～0.05mg/L萘乙酸+10g/L蔗糖，置入容器中混合、攪拌，制成；

B將步驟(3)培養的新生配子體分枝切割成長0.3cm-0.5cm的切段，接種到配子體增殖擴繁培養基上，培養條件：溫度25±2℃；光照強度4000lx；光照時間12小時/天；培養30天，每個配子體切段可新生數量眾多的配子體分枝；