[發明專利]一種CAMV35S基因檢測用引物、相應的試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201110003792.4
• 申請日: 2011-04-02
• 公開（公告）號: CN102140516A
• 公開（公告）日: 2011-08-03
• 發明（設計）人: 曹以誠;杜正平;李志勇;高東微;陳洵;譚慧媚
• 申請（專利權）人: 廣州華峰生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

1.一種CAMV35S基因檢測用引物，其特征在于由外引物F3、外引物B3、內引物FIP和內引物BIP組成，其核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO:1~4所示。

2.一種CAMV35S基因檢測用引物，其特征在于由外引物F3、外引物B3、內引物FIP和內引物BIP組成，其核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO:5~8所示。

3.一種試劑盒，其特征在于包括權利要求1或2所述CAMV35S基因檢測用引物。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于所述試劑盒由權利要求1所述CAMV35S基因檢測用引物、Bst?DNA?聚合酶、反應液、穩定液、顯色液和陽性對照液組成；其中，所述反應液的配方為：每1L反應液中含有1.6~2mmol?dNTP、20~25mmol?Tris-HCl、10~12.5mmol氯化鉀、10~12.5mmol硫酸銨、8~10mmol硫酸鎂、1~1.25ml?TritonX-100、0.8~1mol甜菜堿、內引物FIP/BIP各1.6~2mol和外引物?F3/B3各0.2~0.25mol；所述陽性對照為CAMV35S基因DNA片段。

5.根據曲安咯要求4所述的試劑盒，其特征在于所述顯色液為SYBR?Green?I或EvaGreen。

6.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于所述每1L反應液中含有2mmol?dNTP、25mmol?Tris-HCl、12.5mmol氯化鉀、12.5mmol硫酸銨、10mmol硫酸鎂、1.25ml?TritonX-100、1mol甜菜堿、內引物FIP/BIP各2mol和外引物?F3/B3各0.25mol。

7.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于所述穩定液位石蠟油。

8.利用權利要求3所述試劑盒檢測CAMV35S基因的方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）待測樣品DNA的制備；

（2）在反應管中加入反應液38~40體積%，Bst?DNA聚合酶0.9~1.8體積%，穩定液52~54.5體積%，樣品模板DNA?4.5~9體積%，恒溫反應；

（3）在上述反應管和陽性對照組中分別加入顯色液，混勻，樣品組顯色與對照組相同則為陽性，否則為陰性。

9.根據權利要求8所述的檢測CAMV35S基因的方法，其特征在于步驟（2）中，所述恒溫反應的溫度為63~65℃，反應時間為45~90min。