[發明專利]一種二氫鞘氨醇羥化酶基因及編碼的多肽

無效

• 申請號: 201110003398.0
• 申請日: 2011-01-10
• 公開（公告）號: CN102154335A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發明（設計）人: 呂杰;毛培宏;金湘;馬媛
• 申請（專利權）人: 新疆大學
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N9/02;C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種二氫鞘氨醇羥化酶基因，其特征在于，所述的二氫鞘氨醇羥化酶基因片段的堿基序列全長為438bp，其編碼由序列表中SEQUENCE?LISTING所示的氨基酸序列中101個氨基酸組成的蛋白質。

2.一種如權利要求1所述的二氫鞘氨醇羥化酶基因的獲得方法，所述的二氫鞘氨醇羥化酶基因是來源于產麻黃堿的轉基因重組酵母CGMCC?No.1499，通過SSH實驗獲得，其特征在于，具體包括如下步驟：

(1)采用低能氬離子(Ar⁺)注入介導野生藍麻黃(Ephedra?glauca?L.)基因組DNA在異常漢遜酵母(Hansenula?anomala)中隨機轉化，轉化后的酵母菌通過目標性狀的篩選，獲得生物合成麻黃堿重組酵母菌株CGMCC?No.1499；

(2)將出發菌株和轉基因酵母菌分別從斜面分別轉接入液體培養基，置搖床230r/min、28℃～30℃培養72h，離心分別收集菌體；采用Takara?RNAisoReagent對酵母總RNA進行提取，用1％的瓊脂糖凝膠電泳檢測總RNA的完整性，并用紫外分光光度計估計其純度及濃度；以轉基因酵母為實驗組，出發菌株為驅動組，采用Clontech公司的PCR-Select^TMcDNA?Subtraction?Kit和SMART^TM?PCRcDNA?Synthesis?Kit進行抑制差減雜交實驗；將第二次PCR的產物與pGEM-T?Easy載體連接，連接產物轉大腸桿菌XL10-Gold感受態細胞，進行藍白斑篩選，構建轉基因酵母的差減文庫；對差減文庫中的重組子進行PCR鑒定，將鑒定后的重組子進行測序，測序獲得一段335bp的基因片段；測序結果用BLASTn程序在GenBank數據庫中進行序列相似性搜索，并根據比對結果進行功能預測，確定該基因片段為二氫鞘氨醇羥化酶基因，并推測出該基因編碼蛋白質的氨基酸序列。

3.一種二氫鞘氨醇羥化酶，其特征在于，該二氫鞘氨醇羥化酶蛋白質是由權利要求1所述的基因所編碼如序列表SEQUENCE?LISTING所示的氨基酸序列，其來源于產麻黃堿的轉基因重組異常漢遜酵母(Hansenula?anomala)CGMCC?No.1499。