[發明專利]一種從動物肌肉中分離磷脂酶A2的方法

無效

• 申請號: 201110003353.3
• 申請日: 2011-01-10
• 公開（公告）號: CN102134564A
• 公開（公告）日: 2011-07-27
• 發明（設計）人: 王道營;張露娟;卞歡;劉芳;諸永志;徐為民
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C12N9/16
• 分類號: C12N9/16
• 代理公司: 揚州市錦江專利事務所 32106
• 代理人: 江平

1.一種從動物肌肉中分離磷脂酶A₂的方法，包括以下步驟：

1）取動物瘦肉組織剁碎后加入Tris-HCl緩沖液中勻漿，形成漿液；

2）在4℃的環境溫度下，將漿液離心，取上清液，然后在上清液中加入70%飽和度的硫酸銨進行鹽析，然后再在4℃的環境溫度下離心，將沉淀物用Tris-HCl緩沖液溶解，取得混合溶液；

3）將混合溶液置于透析袋中，在Tris-HCl緩沖液中進行去鹽透析，取得去鹽的透析物；

4）將去鹽的透析物在4℃的環境溫度下離心去除變性蛋白，取得磷脂酶A₂粗品；

5）用蛋白純化系統純化磷脂酶A₂粗品，得磷脂酶A₂純品；

其特征在于：所述步驟5）中，蛋白純化系統為：采用source?15Q、15×5.5?cm的離子交換柱，用pH為8.0、濃度為50mmol/L、流速為0.1mL/min?的Tris-HCl緩沖液平衡，待紫外吸收和電導基線穩定后，再用pH為8.0、含1mol/LNaCl的Tris-HCl緩沖液進行線性洗脫，控制NaCl的Tris-HCl緩沖液進入離子交換柱的流速為1.5mL/min，開始收集濾出液，當濾出液的NaCl濃度達到100%停止收集；將收集的濾出液進行超濾濃縮，取得磷脂酶A₂純品。