[發明專利]一種含有ω干擾素的融合蛋白及制備方法

有效

• 申請號: 201110002132.4
• 申請日: 2011-01-07
• 公開（公告）號: CN102585013A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 陳薇;李建民;李冰;侯利華;于長明;付玲;張金龍
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院生物工程研究所
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K1/22;C12N15/62;C12N15/63;C12N5/10;A61K38/21;A61K47/48;A61P31/12
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技術領域

本發明涉及一種融合蛋白，特別是一種含有ω干擾素與人免疫球蛋白恒定區的融合蛋白及其制備方法。

背景技術

干擾素是一類天然存在的小分子蛋白質和糖蛋白，它們通過大多數有核細胞對病毒感染以及其他抗原刺激的反應而產生和分泌。干擾素使細胞能抵抗病毒感染并對細胞表現出廣泛的作用。它們通過與細胞表面的特異性膜受體結合而發揮其活性。

干擾素(IFN)分為I型和II型，人I型干擾素主要包括IFN-α和IFN-β，兩者共用一種受體IFN-α/β受體，II型干擾素為IFN-γ。I型干擾素(包括IFN-α，IFN-β和IFN-ω)的生物活性基本相同，主要包括抗病毒、抗細胞增殖和免疫調節作用，臨床上可用于治療病毒性肝炎(包括乙型肝炎、丙型肝炎等)、腫瘤、多發性硬化癥等；II型干擾素(IFN-γ)抗細胞增殖和免疫調節作用較強，抗病毒能力較弱。臨床上可用于治療類風濕關節炎、慢性肉芽腫等疾病。

IFN-ω是1985年發現的I型干擾素，因為具有與IFN-α不同的抗原性和免疫原性，有可能發展成一種新的抗病毒藥物，CHO表達的重組人IFN-ω顯示較明顯的抗病毒活性。但是IFN分子量較小，易被腎小球濾過，因而臨床應用時，血漿半衰期較短，一般需要大劑量頻繁用藥，如每周2～3次，而IFN治療肝炎、腫瘤、多發性硬化癥、類風濕關節炎等疾病時，治療周期常常長達數月甚至數年，這種長期大劑量頻繁用藥不僅增加了病人的痛苦和治療費用，而且易產生毒副反應。

為了解決普通干擾素在臨床治療上的不足，多家生物制藥公司致力于開發長效干擾素。其手段是通過對普通干擾素進行聚乙二醇修飾。聚乙二醇(Poly?ethleneglycol，pEG)是一種無毒、無免疫原性的水溶性高分子物質，可以通過共價鍵結合方式修飾蛋白質。聚乙二醇修飾蛋白質藥物不僅可以降低免疫原性和毒性、而且能明顯延長血漿半衰期，提高蛋白質藥物的穩定性。臨床上，廣泛應用的聚乙二醇化干擾素包括先靈葆雅公司開發的聚乙二醇化干擾素α-2b(商品名，佩樂能，PegIntron)；羅氏公司開發的聚乙二醇化干擾素α-2a(商品名，派羅欣，Pegasys)，通過與利巴韋林聯合廣泛用于慢性乙型和丙型肝炎的治療。延長干擾素在動物體內半衰期的另一個方法是使干擾素形成融合蛋白，例如與人血清白蛋白形成融合蛋白，分子量的增加，可以減少腎小球的濾過率，達到延長半衰期的目的。

基于良好的抗病毒活性，IFN-ω具有廣闊的臨床應用前景，因此本領域存在著對制備工藝簡單、高活性并具有較長半衰期的IFN-ω的需求。

發明內容

本發明的第一個目的提供一種有利于工業化生產和臨床應用，活性高且能明顯減少用藥次數的重組人ω干擾素。

基于上述目的，本發明首先提供了一種融合蛋白，所述融合蛋白含有ω干擾素與人免疫球蛋白恒定區部分。

在一個優選的技術方案中，所述人免疫球蛋白為人IgG1。

在一個優選的技術方案中，所述人免疫球蛋白恒定區部分為Fc片段。

在一個優選的技術方案中，所述ω干擾素與人免疫球蛋白恒定區之間沒有連接肽。

在一個優選的技術方案中，所述融合蛋白含有SEQ?ID?NO：2所示的氨基酸序列。

本發明還提供了上述融合蛋白的同源二聚體，在該二聚體中，兩個單體通過二硫鍵相連接。

本發明還提供了含有上述融合蛋白的藥物制劑。

本發明進一步提供了含有上述融合蛋白的核苷酸序列。

在一個優選的技術方案中，所述核苷酸序列選自下列序列：

(1)SEQ?ID?NO：1；

(2)與核苷酸序列SEQ?ID?NO：1至少95％同源性的核苷酸序列；

(3)在嚴謹條件下與核苷酸序列SEQ?ID?NO：1雜交的核苷酸序列；

(4)或者與(1)-(3)任何一種核苷酸序列互補的核苷酸序列。

上文所述的“互補”，是指核苷酸中兩條單鏈的堿基間通過氫鍵形成的配對關系，即，腺嘌呤-胸腺嘧啶(A-T)配對，鳥嘌呤-胞嘧啶(G-C)配對。