[發明專利]厚革質葉片石蠟切片方法

有效

• 申請號: 201110001004.8
• 申請日: 2011-01-05
• 公開（公告）號: CN102175482A
• 公開（公告）日: 2011-09-07
• 發明（設計）人: 劉育梅;盧昌義
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: G01N1/06
• 分類號: G01N1/06;G01N1/28;G01N1/30
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所 35200
• 代理人: 馬應森

1.厚革質葉片石蠟切片方法，其特征在于包括以下步驟：

1)將葉片沿主脈兩側切開，將中央有葉脈的部分再橫切成小段；

2)將步驟1)所得到的葉片用固定劑固定；

3)將步驟2)用固定劑固定的葉片脫水；

4)用二甲苯和乙醇的不同體積比的溶液作過渡，每級2～4h，具體過程為二甲苯∶100％乙醇為1∶2溶液中浸泡2～4h→二甲苯∶100％乙醇為1∶1溶液中浸泡2～4h→二甲苯∶100％乙醇為2∶1溶液中浸泡2～4h→純二甲苯中浸泡2～4h→純二甲苯中浸泡2～4h；

5)透蠟和包埋：透蠟采用熔點為52～54℃的軟蠟，按體積比，二甲苯∶石蠟為1∶1溶液于37～40℃恒溫箱中過渡浸蠟48～72h，之后換成純石蠟于60～63℃恒溫箱中浸蠟，期間要換1或2次純石蠟，透蠟后用硫酸紙，3張為一個厚度，折2cm×2cm×3cm大的紙盒，用于包埋；

6)切片后展片，再貼片，然后烤片；

7)脫蠟復水；

8)染色后封片。

2.如權利要求1所述的厚革質葉片石蠟切片方法，其特征在于在步驟1)中，所述將葉片沿主脈兩側切開，是用單面刀片沿主脈兩側各5～6mm處切開；所述小段的長度為5～6mm。

3.如權利要求1所述的厚革質葉片石蠟切片方法，其特征在于在步驟2)中，所述固定劑為萬能固定液，配方為70％乙醇90ml、冰醋酸5ml、福爾馬林5ml；所述固定的時間至少24h。

4.如權利要求1所述的厚革質葉片石蠟切片方法，其特征在于在步驟3)中，所述脫水的具體方法為：以60％乙醇開始，5％遞增，每級3～5h，具體為60％乙醇3～5h→65％乙醇中3～5h→70％乙醇中3～5h→75％乙醇中3～5h→80％乙醇中3～5h→85％乙醇中3～5h→90％乙醇中3～5h→95％乙醇中3～5h→100％乙醇3～5h→100％乙醇3～5h。

5.如權利要求1所述的厚革質葉片石蠟切片方法，其特征在于在步驟6)中，所述切片采用生物切片機切片，切片的厚度為10～12μm。

6.如權利要求1所述的厚革質葉片石蠟切片方法，其特征在于在步驟6)中，所述展片是先在25％～35％乙醇過渡，然后在水溫為48～55℃中的溫水中展片。

7.如權利要求1所述的厚革質葉片石蠟切片方法，其特征在于在步驟6)中，所述貼片是直接用乙醇燈外焰輕微烘片。

8.如權利要求1所述的厚革質葉片石蠟切片方法，其特征在于在步驟6)中，所述烤片是于35～39℃的溫箱內烤片24～36h。

9.如權利要求1所述的厚革質葉片石蠟切片方法，其特征在于在步驟7)中，所述脫蠟復水的具體方法為：按體積比，100％乙醇∶二甲苯為1∶2溶液中1～2min→100％乙醇∶二甲苯為1∶1溶液中1～2min→100％乙醇∶二甲苯為2∶1溶液中1～2min→100％乙醇1～2min→100％乙醇1～2min→95％乙醇1～2min→85％乙醇1～2min→70％乙醇1～2min→50％乙醇1～2min。

10.如權利要求1所述的厚革質葉片石蠟切片方法，其特征在于在步驟8)中，所述染色的具體方法為：1％番紅溶液染色2～4h→95％乙醇1～2min→100％乙醇1～2min→100％乙醇1～2min→100％乙醇∶二甲苯為2∶1溶液中1～2min→100％乙醇∶二甲苯為1∶1溶液中1～2min→100％乙醇∶二甲苯為1∶2溶液中1～2min→二甲苯10～15min→二甲苯10～15min→1％固綠復染35～45s；所述封片采用加拿大樹膠或透明指甲油進行封片。