[發(fā)明專利]結(jié)合至血管內(nèi)皮生長因子2（VEGFR-2/KDR）上并阻斷其活性的重組抗體結(jié)構(gòu)

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201080069006.4
• 申請日: 2010-07-07
• 公開（公告）號: CN103119063A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 博塔恩·科拉伊·巴爾希歐格魯;艾林·歐茲代米爾巴哈德爾;艾丁·巴哈爾;卡邁勒·巴伊薩爾;穆熱·塞爾哈特里;奧默·卡察爾;圖爾克·基利克;埃姆爾·阿克古恩;阿卜杜勒卡迪爾·歐茲坎
• 申請（專利權(quán)）人: 土耳其科學(xué)技術(shù)研究理事會
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;A61K31/395;A61P27/02;A61P35/00
• 代理公司: 北京康信知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11240
• 代理人: 李丙林;張英

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明的主要目的是獲得可以作為抑制劑參與血管生成的重組單鏈可變區(qū)片段抗體，其通過與VEGFR2（細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域）相互作用，在腫瘤發(fā)展中并因而在與血管生成相關(guān)的疾病機(jī)制中起關(guān)鍵性作用。

背景技術(shù)

活組織的發(fā)育所需要的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)通過血管被運(yùn)送到組織而廢物質(zhì)也通過血管被運(yùn)出組織。雖然血管生成，從已經(jīng)存在的血管中生長新血管，是胚胎發(fā)生、傷口愈合、和女性生殖系統(tǒng)的月經(jīng)期間的生理現(xiàn)象，它病理性地出現(xiàn)在炎性疾病中，如關(guān)節(jié)炎、慢性炎癥、炎癥性腸道疾病、和牛皮癬以及各種組織的癌癥如乳腺、膀胱、結(jié)腸、肺、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、黑色素瘤、腎、胰腺、子宮、子宮頸、和膠質(zhì)母細(xì)胞瘤，以及眼科疾病如老年相關(guān)的黃斑變性。

血管生成在固體腫瘤的體內(nèi)形成、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中的意義在1971年第一次被認(rèn)定（Folkman?J.,1971,N?Eng?J?Med.,285,1182-1186）。通過毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖出現(xiàn)血管生成（Risau?W,1997,Nature,386,671-674）。與所有生物事件一樣，生物體通過分泌血管生成抑制因子對血管生成刺激做出反應(yīng)。在正常情況下血管生成促進(jìn)因子和血管生成抑制因子處于平衡狀態(tài)，并且當(dāng)這個平衡針對血管生成抑制因子被破壞時，血管生成開始。在1989年Ferrara等人定義了血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）（Ferrara?and?Henzel,1989Biochem?Biophys?Res?Commun161,851-858）。在血管生成中VEGF起著關(guān)鍵的作用（Ferrara?N?et?al.,1996,Nature,380:439-442）。在小鼠上的實(shí)驗(yàn)表明，由于嚴(yán)重的血管問題，僅缺失關(guān)于VEGF的等位基因?qū)е略缙谂咛ニ劳觯–armilet?P.et?al.,1996,Nature,380,435-439）。VEGF是重量為45kDa的以二硫鍵結(jié)合的結(jié)合肝素的同型二聚體堿性蛋白質(zhì)。目前已經(jīng)定義了其多個亞組，如VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D以及VEGF-E。在哺乳動物中，VEGF-A具有多種亞型，如VEGF₁₂₁，、VEGF₁₆₅，VEGF₁₈₉，VEGF₂₀₆和VEGF₁₄₅（基于氨基酸數(shù)目）。在這些亞型中，VEGF₁₆₅是主要的種類（Ferrara?N.,et?al.,2009,Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.,29,789-791）。

通過結(jié)合至細(xì)胞膜上的酪氨酸激酶受體，VEGF顯示其細(xì)胞內(nèi)作用。VEGF受體包含兩部分。第一部分是包含酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域的細(xì)胞內(nèi)部分。第二部分是包含5至7個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)（其包含配體結(jié)合區(qū)域）的細(xì)胞外區(qū)域（Ferrara?N.et?al.,2003,Nat.Med.9:669-676）。除了證明Flt-1（VEGFR-1），flk-1/KDR（VEGFR-2），和Flt-4（VEGFR-3）為VEGF受體外，最近已經(jīng)定義了稱為跨膜蛋白-1（neuropilin-1）和跨膜蛋白-2（neuropilin-2）（其在內(nèi)皮細(xì)胞表面上表達(dá)并且對VEGF-A具有低結(jié)合特性）的受體結(jié)構(gòu)。KDR（包含激酶插入結(jié)構(gòu)域的受體）已于1991年被Terman等人通過專利號PCT/US92/01300定義（Terman?et?al.,1991,.Oncogene6:1677-1683）。在1991年通過測序方法揭示Flk-1的序列（Mathhews?W?et?al.,1991,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A,88:9026-9030）。這些研究已經(jīng)證明KDR是FLK-1受體的人類類似物。此外，KDR和FLK-1受體也被稱為VEGFR2。