[發(fā)明專(zhuān)利]用于細(xì)胞因子遞送的穹窿體復(fù)合物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201080060374.2
• 申請(qǐng)日: 2010-11-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102712697A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 倫納德·H·羅馬;瓦萊麗·A·尅科赫爾夫;史蒂芬·M·杜拜奈特;謝瑞芬·沙爾馬;烏彭德拉·K·卡
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 加利福尼亞大學(xué)董事會(huì);美國(guó)退伍軍人事務(wù)部代表美國(guó)政府
• 主分類(lèi)號(hào): C07K19/00
• 分類(lèi)號(hào): C07K19/00;C12N15/62;C12N15/19;A61K38/19;A61P35/00
• 代理公司: 北京萬(wàn)慧達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11111
• 代理人: 戈曉美;張一軍

相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用

本申請(qǐng)要求申請(qǐng)日為2009年11月2日的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)No.61/257,358的優(yōu)先權(quán)，其全部?jī)?nèi)容在此整體參考并入，用于所有目的。

有關(guān)聯(lián)邦政府贊助研究或開(kāi)發(fā)的聲明

本發(fā)明在美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院(基金號(hào)5R01CA126944)和美國(guó)退伍軍人事務(wù)部的資助下進(jìn)行。政府享有本發(fā)明的某些權(quán)益。

參考序列表

本申請(qǐng)連同電子形式的序列表一起提交，該序列表以命名為11111US_sequencelisting.txt的文件提交，該文件于201X年X月XX日創(chuàng)建，XXX，XXX字節(jié)大小。該序列表參考并入本申請(qǐng)。

背景技術(shù)

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及包含細(xì)胞因子，如趨化因子CCL-21的穹窿體復(fù)合物的組合物，以及穹窿體復(fù)合物將細(xì)胞因子遞送至細(xì)胞的用途。穹窿體復(fù)合物包括將感興趣的細(xì)胞因子與主穹窿蛋白相互作用的結(jié)構(gòu)域融合的融合蛋白。本發(fā)明還包括組合物的用途，即作為癌癥免疫治療劑，用于活化針對(duì)腫瘤的免疫應(yīng)答以及用于治療癌癥，包括肺癌。

對(duì)相關(guān)技術(shù)的描述

穹窿體是于1986年首次描述的細(xì)胞質(zhì)中普遍存在的核糖核蛋白顆粒，其可見(jiàn)于所有真核細(xì)胞中[1]。天然穹窿體為12.9±1MDa的卵圓形，總體尺寸約為寬40nm長(zhǎng)70nm[2，3]，其存在于幾乎所有真核有機(jī)體中，每個(gè)細(xì)胞中含10⁴至10⁷個(gè)顆粒[4]。盡管其在細(xì)胞中豐度較高，但穹窿體的功能仍尚不明確，雖然已將其與多種細(xì)胞過(guò)程相關(guān)聯(lián)，包括先天性免疫應(yīng)答、癌細(xì)胞中的多藥耐藥、多面信號(hào)通路、以及細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)[5]。

穹窿體在體外是高度穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)，且大量研究顯示這些顆粒是非免疫原性的[6]。可以使用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)設(shè)計(jì)和表達(dá)穹窿體，且可以使用名為INT的蛋白靶向結(jié)構(gòu)域(因穹窿體相互作用而得名)，將異源性蛋白導(dǎo)入這些重組顆粒中。已將若干種異源性蛋白與INT結(jié)構(gòu)域融合(例如，熒光和酶蛋白)，這些融合蛋白在重組穹窿體中表達(dá)并保留其天然特性，因而賦予了這些穹窿體新的性質(zhì)[7，8]。

已將CLL-21鑒定為淋巴趨化因子，其主要且組成性地由高內(nèi)皮小靜脈在淋巴結(jié)和派伊爾結(jié)(Peyer’s?patche)中表達(dá)，以及由淋巴管和間質(zhì)細(xì)胞在脾臟和闌尾中表達(dá)[9]。CCL-21與趨化因子受體CCR7結(jié)合，其是成熟DC、初始和記憶性T細(xì)胞的趨化劑[10，11]。該趨化因子以及CCL-19均是正常淋巴組織構(gòu)成所需的，其是有效的T細(xì)胞-DC相互作用最終所必需的。自然殺傷(NK)和自然殺傷T(NKT)抗腫瘤效應(yīng)器表達(dá)CCR7受體，且其可以被CCL-21所趨化吸引。趨化因子將DC、淋巴細(xì)胞以及NK和NKT效應(yīng)器吸引至腫瘤的用途可以作為有效的抗腫瘤策略。基于該理念，此前的研究結(jié)果顯示，在鼠源性肺癌模型中瘤內(nèi)給予重組的CCL-21可以降低腫瘤負(fù)荷[12]。然而，由重組CCL-21誘導(dǎo)的抗腫瘤應(yīng)答需要高劑量、高頻率的給藥，因?yàn)榱鰞?nèi)給予的蛋白無(wú)法在局部長(zhǎng)期保留。盡管這些研究描述了CCL-21作為有效抗腫瘤劑的作用，但是頻繁高劑量的瘤內(nèi)給藥可能因其存在潛在的全身毒性而具有臨床局限性。基于該方法的局限性，檢驗(yàn)了自體樹(shù)突狀細(xì)胞在瘤內(nèi)CCL-21遞送中的用途[13.14]。臨床前研究中已證實(shí)，在鼠源性肺癌模型中瘤內(nèi)給予CCL-21基因修飾的樹(shù)突狀細(xì)胞使腫瘤得到根治。在對(duì)CCL-21的抗腫瘤性質(zhì)進(jìn)行的這個(gè)最初描述后，若干其它研究小組也報(bào)道了CCL-21在多種模型系統(tǒng)中具有高效的抗腫瘤性質(zhì)[15-19]。在所有模型中，CCL-21均顯示出對(duì)腫瘤的高效抑制作用，其依賴(lài)于宿主T細(xì)胞免疫。基于廣泛的臨床前評(píng)估，在一項(xiàng)針對(duì)晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的I期臨床試驗(yàn)中，瘤內(nèi)注射轉(zhuǎn)導(dǎo)了表達(dá)次級(jí)淋巴趨化因子基因的腺病毒載體的DC(Ad-CCL-21-DC)并進(jìn)行了評(píng)估。

盡管利用趨化因子基因修飾的DC進(jìn)行瘤內(nèi)給藥的臨床研究顯示，其有望作為一種有效的治療方法，但是表達(dá)CCL-21的自體樹(shù)突狀細(xì)胞的制備復(fù)雜、昂貴且費(fèi)時(shí)。急需一種有效的并且通過(guò)類(lèi)似治療機(jī)制工作的試劑。需要避免制備自體DC、使批次間的變異性降至最低、以及允許具有可比性和進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化的組合物和方法。需要以啟動(dòng)抗腫瘤免疫應(yīng)答為目的的細(xì)胞因子遞送，例如非基于DC途徑的瘤內(nèi)CCL-21遞送。