[發明專利]二酰甘油酰基轉移酶基因及其用途有效

申請號：	201080057882.5	申請日：	2010-12-20
公開（公告）號：	CN102844431A	公開（公告）日：	2012-12-26
發明（設計）人：	落合美佐	申請（專利權）人：	三得利控股株式會社
主分類號：	C12N15/09	分類號：	C12N15/09;A23L1/30;A61K8/36;A61K8/37;A61K31/202;A61K31/232;A61P17/00;A61P17/18;A61Q19/00;A61Q19/08;C12N1/15;C12N9/10;C12P7/64
代理公司：	上海市華誠律師事務所 31210	代理人：	徐申民
地址：	日本國***	國省代碼：	日本;JP
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摘要：
搜索關鍵詞：	甘油轉移酶基因及其用途
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及編碼新型二酰甘油酰基轉移酶的多核苷酸及其利用方法。?

背景技術

作為貯藏脂質的三酰甘油通過向二酰甘油轉移酰基而生成。向二酰甘油轉移酰基的酶被稱為二酰甘油酰基轉移酶(diacylglycerol?acyltransferase：DGAT)，已知將酰基CoA作為酰基供體(酰基給予體)的類型的酰基CoA:二酰甘油酰基轉移酶(acyl-CoA:diacylglycerol?acyltransferase)(EC：2.3.1.20)，將磷脂作為酰基供體的類型的磷脂:二酰甘油酰基轉移酶(phospholipids:diacylglycerolacyltransferase:磷脂二酰甘油酰基轉移酶(PDAT))(EC：2.3.1.158)。?

將酰基CoA作為酰基供體的DGAT由于一級結構不同，可分為DGAT1和DGAT2的2個家族。(非專利文獻1及2)。此外，有關磷脂二酰甘油酰基轉移酶(PDAT)基因，已知從酵母及植物等中克隆(專利文獻1、非專利文獻3及4)，其中，有關來自擬南芥的磷脂二酰甘油酰基轉移酶(PDAT)，已知有可將磷脂酸、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺等各種磷脂作為酰基給予體，且可轉移C₁₀-C₂₂的酰基等(非專利文獻5)。?

菌類中研究較多的釀酒酵母(Saccharomyces?cerevisiae)中，作為編碼DGAT的基因，已知有屬于DGAT2家族的DGA1(YOR245C)(非專利文獻6)及作為磷脂二酰甘油酰基轉移酶(PDAT)的LRO1(YNR008W)。雖然由于由此2個基因編碼的酶占據了酵母的DGAT活性的大部分，但即使同時破壞這些基因，DGAT活性也不會完全喪失。已知有關該殘留DGAT活性，由作為酰基CoA:甾醇酰基轉移酶基因的ARE1基因和ARE2基因編碼的酶的DGAT活性決定(非專利文獻7)。?

作為脂質生產菌的高山被孢霉(Mortierella?alpina:M.alpina)中，至今為止?已報道的有將酰基CoA作為酰基供體的4種DGAT及其基因(2種DGAT1家族基因和2種DGAT2家族基因)(專利文獻2及3、非專利文獻8)。?

但在高山被孢霉(M.alpina)中，將磷脂作為酰基供體的磷脂二酰甘油酰基轉移酶(PDAT)的同源物還不為人所知。已知Δ5脂肪酸去飽和酶為氧化二高-γ-亞麻酸(DGLA)并催化花生四烯酸(ARA)生成的酶，但在高山被孢霉(M.alpina)中，因為主要作用于作為磷脂酰膽堿的酰基而存在的二高-γ-亞麻酸(DGLA)，所以，花生四烯酸作為磷脂酰膽堿的酰基而生成(非專利文獻9)。因此，為了促進高山被孢霉(M.alpina)中含有花生四烯酸的三酰甘油的生成，需要從作為磷脂酰膽堿等磷脂的酰基而存在的花生四烯酸中生成含有花生四烯酸的三酰甘油的酶。?

現有技術文獻?

專利文獻?

專利文獻1日本特表2002-541783公報?

專利文獻2美國專利申請公開第2006/0094086號說明書?

專利文獻3美國專利申請公開第2006/0091087號說明書?

非專利文獻?

非專利文獻1?Proc.Natul.Acad.Sci.USA，95，13018-13023，1998?

非專利文獻2?J.B.C.，276(42)，38862-38869，2001?

非專利文獻3?J.B.C.，275(21)，15609-15612，2000?

非專利文獻4?Proc.Natl.Acd.Sci.USA，97(12)，6487-6492?

非專利文獻5?Plant?Physiology，135，1324-1335?

非專利文獻6?J.Bacteriol.，184，519-524，2002?