[發明專利]能夠識別來自巨細胞病毒的抗原的T細胞受體

有效

• 申請號: 201080053975.0
• 申請日: 2010-09-29
• 公開（公告）號: CN102656188A
• 公開（公告）日: 2012-09-05
• 發明（設計）人: H.斯陶斯;S-A.薛
• 申請（專利權）人: UCL商務股份有限公司
• 主分類號: C07K14/705
• 分類號: C07K14/705;C12N15/12;C12N5/10;A61K39/245;A61K38/17
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 封新琴

發明領域

本發明涉及能夠識別來自巨細胞病毒(CMV)的抗原的T細胞受體(TCR)。本發明還涉及TCR基因轉化以產生CMV特異性T細胞的用途，以及它們用于治療和/或預防CMV疾病的用途。

背景技術

巨細胞病毒是人類的常見病原體，并且其通常與無癥狀原發感染、以及隨后的病毒持續性或潛伏期階段相關。在先天性或獲得性免疫缺陷患者以及進行實體器官或骨髓移植的患者中，原發CMV感染和持續的CMV的再活化經常與威脅生命的侵襲性內臟疾病相關。

同種異體造血干細胞移植(Allo-HSCT)后的潛伏期人皰疹病毒、巨細胞病毒(CMV)的再活化能導致顯著的發病率和死亡率，除非迅速進行治療。抗病毒治療通常是有效的，但具有嚴重的副作用，諸如骨髓抑制(Ganciclovir^TM)或腎毒性(Foscarnet^TM)

在UK和歐洲已經在臨床I/II期試驗中測試了CMV的細胞免疫治療。在這些試驗中，從CMV血清反應陽性供體的外周血中分離CMV特異性T細胞，并再輸入至CMV再活化后的接受者中，從而產生持久的抗病毒反應。CD8+CMV-特異性細胞毒T-細胞(CTL)的移植后復原消除了CMV相關疾病的發生。CMV再活化的細胞治療的優勢是免疫記憶的轉移，這能減少隨后再活化的數量。

在UK進行了越來越多的高度免疫抑制(或T細胞排除)減少的強度調節Allo-HSCT。該方法降低了在患有更多并發病老年患者中移植的毒性。因此，在Allo-HSCT后更多的患者有CMV再活化的風險。此外，由于這些患者是老年人并且具有其他的并發病，從而使得它們對當前利用的抗病毒藥物治療更不耐受。

由于約50%的成年個體之前已被CMV感染，因此進行了顯著量的CMV“錯配”Allo-HSCT，即其中供體是CMV血清陰性的，而接受者是CMV血清陽性的。其中供體為CMV血清陰性的移植接受者不會受益于細胞免疫治療，這是因為缺乏CMV特異性記憶T細胞。因此此類患者具有嚴重的產生自潛伏CMV再活化的并發癥風險。當前，沒有從未感染的個體分離病毒特異性T細胞的策略，因為前體頻率很低或不存在，并且T細胞反應的體外激發是無效的。

因此存在對治療或預防CMV疾病，尤其是Allo-HSCT后潛伏CMV再活化的替代方法的需要。而且還存在對用于細胞免疫治療的CMV特異性T細胞替代來源的需要。

附圖簡述

圖1-逆轉錄病毒載體構建體pMP71-pp65(α-2A-β)-Cys1的圖示。

圖2-CMV?TCR-轉導的人T細胞能通過抗Vβ13抗體鑒定(上圖)。CMVTCR-轉導的T細胞結合特定四聚體并可在體外擴增(下圖)。

圖3-由CMV?TCR-轉導的人T細胞進行的HLA-A*0201-限制性CMVpp65特定性細胞因子的分泌。

圖4-X3-PBMC的CMV?TCR轉導。

圖5-CMV-TCR-X3-CD4-cytk

圖6-CMV-TCR-X3-CD8-cytk

本發明各方面概述

本發明的發明人組裝了對主要CMV基質磷蛋白pp65有特異性的T細胞受體。他們還構建了包含TCRα和β基因的逆轉錄病毒載體，并且將其用于轉導人T細胞。該細胞顯示表達CMV?pp65特異性TCR并且顯示出功能性的抗原特異性活性。

細胞治療或TCR基因治療的應用提供了與治療CMV疾病的常規抗病毒治療相比的多種優勢。

常規應用中的抗病毒藥物治療的施與需要患者是住院病人(Foscarnet^TM)或進行每天兩次日間護理(Ganciclovir^TM)。羥甲基無環鳥苷(Ganciclovir)可通過CADD泵(如果有的話)施與。為此涉及NHS消費、健康、社會和心理學，特別是因為治療的持續時間通常超過2周。相反，細胞治療的應用需要單次輸注T細胞。

還存在細胞治療轉移了免疫記憶的優勢，其例如減少了allo-HSCT后的CMV再活化的數量。

因此，在第一個方面，本發明提供了對巨細胞病毒(CMV)磷蛋白pp65特異的T細胞受體(TCR)。

該TCR可從pp65識別表位NLVPMVATV(SEQ?ID?No.1)。

當由主要組織相容性復合物(MHC)呈遞時，該TCR可能能夠結合具有氨基酸序列NLVPMVATV(SEQ?ID?No.1)的肽。

該TCR的α鏈和β鏈各自具有三個互補決定區(CDR)。該TCR的α鏈和β鏈可具有以下CDR3序列：