[發明專利]耐藥性甲型流感病毒的檢測方法及其試劑盒

無效

• 申請號: 201080053608.0
• 申請日: 2010-11-08
• 公開（公告）號: CN102686742A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 井上雅文;T·巴克漢姆
• 申請（專利權）人: 新加坡科技研究局;陳篤生醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/44
• 代理公司: 北京金信立方知識產權代理有限公司 11225
• 代理人: 朱梅;王榮

技術領域

本發明涉及用于檢測甲型流感病毒的存在的引物、探針以及使用該引物和/或探針的方法和試劑盒。特別地，本發明涉及抗病毒藥物耐藥性甲型H1N1亞型流感病毒的檢測。

背景技術

甲型流感是由流感病毒的甲型毒株引起的動物傳染疾病，流感病毒的甲型毒株通常傳染鳥，較不常見傳染豬。甲型流感病毒有很多亞型。這些亞型都基于血細胞凝集素（HA）片段4（具有14種變種）和神經氨酸酶（NA）片段6（具有9種變種）。正是病毒中的這兩個片段引發毒性。

例如，眾所周知，甲型H1N1亞型流感病毒變異迅速，并且已顯示出高致病性并在人類中能引發嚴重的疾病。H1N1已被視為快速遺傳進化和大流行性變化的模型。通常，進化解釋為是對由缺乏復制功能的聚合酶復合體產生的頻繁復制錯誤的選擇。隨后為了進化優勢，如逃避宿主的免疫應答，而選擇這些錯誤，這使得流感擴散并固定所選定的突變。流感病毒也會使用重組從而通過同源重組來快速進化。因此，在流感中突變頻繁發生并且這些變體可以包括如抗病毒藥物耐藥性、逃避免疫識別的能力等性質。而且，在英國對64名兒童的研究證實了H1N1流感病毒比H3N2流感病毒和乙型流感病毒具有更高比率的耐藥性。

過去較為常用的抗病毒藥物之一是奧塞米韋（oseltamivir）。其過去被用作治療季節性H1N1的單一療法。然而，隨著具有奧塞米韋耐藥性的H1N1的出現，奧塞米韋的有效性下降。在每個報告的病例中，都分離出帶有神經氨酸酶多態性H274Y的H1N1。這個變化是可以預期的，因為其位于該酶的活性位點，而且奧塞米韋結合需要在該活性位點處的構象變化，而H274Y抑制這種變化，從而產生了一種具有奧塞米韋耐藥性的毒株。

帶有H275Y突變的季節性H1N1病毒在2007-2008的北半球流感季節期間蔓延很廣。在2007-2008年，從大洋州、東南亞和南非收集的甲型流感病毒（H1N1）分離物中有64%檢測到了H275Y突變（Hurt,2009）。感染了奧塞米韋耐藥性病毒的患者可能比感染了野生型病毒的患者更容易發展成肺炎或者鼻竇炎。過去普遍認為在季節性H1N1中耐藥性的出現是由于藥物療法的選擇性壓力導致的以及耐藥性病毒可能較不太適合于疾病傳播。然而，2002和2007年之間，在歐洲，在面對相對低使用量的奧塞米韋，耐藥性的季節性H1N1快速取代了易感的野生型季節性H1N1（Kramarz?P等,2009）。

最近，在2009年流感大流行中，人們發現，分離出的新的病毒株（甲型（H1N1）2009流感病毒）是由四種不同流感病毒——北美豬流感病毒、北美禽流感病毒、人流感病毒以及在亞洲和歐洲通常發現的豬流感病毒的遺傳成分組成。這種新毒株的出現似乎是H1N1亞型的所有四種不同毒株中的人流感病毒和豬流感病毒重配的結果。

近來也已在至少39個H1N1病例中報道了與體外奧塞米韋耐藥性相關的主要突變（H275Y）（WHO?Pandemic?(H1N1)2009-update?71（世界衛生組織(H1N1)2009大流行-更新71））。人們由體外數據設想了該病毒中的這種突變的臨床重要性。季節性H1N1中的這種突變在世界范圍內的大流行從2007年的可以忽略迅速增加到2009年三月的高至95%（http://www.who.int/csr/disease/influenza/h1n1_table/en/index.html）。

甲型（H1N1）2009流感病毒于2009年5月在新加坡首次檢測到。在降低病毒傳播的努力中，將感染的患者進行隔離直到作為傳染性的替代標記（surrogate?marker）的PCR不再能檢測到該病毒。對從新病例取得的樣本系統地進行H275Y突變的監視。

具有奧塞米韋耐藥性的季節性H1N1的自發性出現并不令人驚訝，但是其傳播性、流行性和持久性是料想不到的。真正的問題是對帶有H275Y突變的流感的病危病例使用奧塞米韋作為單一療法時，奧塞米韋是否會失敗。我們過去認為對于季節性H1N1其會失敗，并預期對甲型（H1N1）2009流感病毒也相同。因此，人們更關注于考慮甲型（H1N1）2009流感病毒的耐藥性突變體是否會重復在2007-2009年中季節性H1N1的全球性擴散以及是否會取代目前的野生型“易感”H1N1病毒和通常占主要地位的H3N2病毒兩者而發展成為主要的流感病毒。

發明內容