[發明專利]具有提高的生產丁醇能力的重組微生物和使用其生產丁醇的方法

有效

• 申請號: 201080052858.2
• 申請日: 2010-09-21
• 公開（公告）號: CN102666839A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發明（設計）人: 李相燁;張維新;李真英;李鐘民;樸軫煥
• 申請（專利權）人: 韓國科學技術院;生物普爾肯株式會社;GS加德士公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P7/16;C12N15/52
• 代理公司: 北京律誠同業知識產權代理有限公司 11006
• 代理人: 徐金國

1.一種制備具有提高的生產丁醇能力的重組微生物的方法，該方法包括，在具有乙酰CoA和丁酰CoA生物合成路徑的宿主微生物中，刪除編碼將乙酰CoA轉化成乙酸的酶的基因。

2.根據權利要求1的制備具有提高的生產丁醇能力的重組微生物的方法，該方法包括進一步刪除基因，該基因選自(a)編碼分別將乙酸和丁酸轉化成乙酰CoA和丁酰CoA、并將乙酰乙酰CoA轉化成乙酰乙酸的酶的基因，和(b)編碼將丁酰CoA轉化成丁酸的酶的基因。

3.根據權利要求1或2的制備具有提高的生產丁醇能力的重組微生物的方法，該方法包括進一步擴增選自編碼1)乙醇脫氫酶、2)乙醛脫氫酶和3)乙醛/乙醛脫氫酶的基因的一種或多種基因。

4.根據權利要求3的制備具有提高的生產丁醇能力的重組微生物的方法，其中編碼乙醇脫氫酶的基因是adh，編碼乙醛脫氫酶的基因是ald，以及編碼乙醛/乙醛脫氫酶的基因是adhE1。

5.根據權利要求3的制備具有提高的生產丁醇能力的重組微生物的方法，其中乙醛/乙醛脫氫酶具有SEQ?ID?NO:51本身，或SEQ?ID?NO:51的450和650氨基酸序列之間的一個或多個突變。

6.根據權利要求1的制備具有提高的生產丁醇能力的重組微生物的方法，其中所述宿主微生物源自梭菌種。

7.根據權利要求1的制備具有提高的生產丁醇能力的重組微生物的方法，其中將乙酰CoA轉化成乙酸的酶是磷酸轉乙酰化酶或乙酸激酶。

8.根據權利要求7的制備具有提高的生產丁醇能力的重組微生物的方法，編碼磷酸轉乙酰化酶的基因是eutD或pta，且編碼乙酸激酶的基因是askA或ackA。

9.根據權利要求2的制備具有提高的生產丁醇能力的重組微生物的方法，其中分別將乙酸和丁酸轉化成乙酰CoA和丁酰CoA、并將乙酰乙酰CoA轉化為乙酰乙酸的酶是CoA移轉酶，并且其中將丁酰CoA轉化成丁酸的酶是磷酸轉乙酰化酶或丁酸激酶。

10.根據權利要求9的制備具有提高的生產丁醇能力的重組微生物的方法，編碼CoA移轉酶的基因是ctfAB或atoDA，并且編碼磷酸轉乙酰化酶的基因是ptb，并且編碼丁酸激酶的基因是選自buk和bukII的一種或多種基因。

11.一種具有提高的生產丁醇能力的重組微生物，其中在具有乙酰CoA和丁酰CoA生物合成路徑的宿主微生物中，編碼將乙酰CoA轉化成乙酸的酶的基因被刪除。

12.根據權利要求11的具有提高的生產丁醇能力的重組微生物，其中在該重組微生物中進一步刪除基因，該基因選自(a)編碼分別將乙酸和丁酸轉化成乙酰CoA和丁酰CoA、并將乙酰乙酰CoA轉化成乙酰乙酸的酶的基因，和(b)編碼將丁酰CoA轉化成丁酸的酶。

13.根據權利要求11或12的具有提高的生產丁醇能力的重組微生物，其中重組微生物進一步擴增選自編碼1)乙醇脫氫酶、2)乙醛脫氫酶、和3)乙醛/乙醛脫氫酶的基因的一種或多種基因。

14.根據權利要求13的具有提高的生產丁醇能力的重組微生物，其中編碼乙醇脫氫酶的基因是adh，編碼乙醛脫氫酶的基因是ald，且編碼乙醛/乙醛脫氫酶的基因是adhE1。

15.根據權利要求13的具有提高的生產丁醇能力的重組微生物，其中所述乙醛/乙醛脫氫酶具有SEQ?ID?NO:51本身，或SEQ?ID?NO:51的450和650氨基酸序列之間的一個或多個突變。

16.根據權利要求11的具有提高的生產丁醇能力的重組微生物，其中所述宿主微生物源自梭菌種。

17.根據權利要求11的具有提高的生產丁醇能力的重組微生物，其中將乙酰CoA轉化成乙酸的酶是磷酸轉乙酰化酶或乙酸激酶。

18.根據權利要求17的具有提高的生產丁醇能力的重組微生物，編碼磷酸轉乙酰化酶的基因是eutD或pta，且編碼乙酸激酶的基因是askA或ackA。