[發明專利]制造L-肉毒堿的方法

有效

• 申請號: 201080051331.8
• 申請日: 2010-11-12
• 公開（公告）號: CN102656139A
• 公開（公告）日: 2012-09-05
• 發明（設計）人: 格薩·帕拉迪斯;湯瑪斯·比希納
• 申請（專利權）人: 隆薩有限公司
• 主分類號: C07C227/34
• 分類號: C07C227/34;C07C227/42;C07C229/22
• 代理公司: 隆天國際知識產權代理有限公司 72003
• 代理人: 吳小瑛;任曉華

發明領域

本發明涉及制造L-肉毒堿的方法。

發明背景

肉毒堿(維生素Bt；3-羥基-4-三甲基銨基-丁酸鹽)是由氨基酸(賴氨酸和蛋氨酸)生物合成的季銨化合物。在活細胞中，需要其在分解脂類以產生代謝能量期間將脂肪酸從細胞溶質運輸至線粒體。其被用作營養補劑。

肉毒堿以兩種立體異構體形式存在。具生物活性的形式是L-肉毒堿，而其對映體D-肉毒堿則不具生物活性。當在工業方法中制造L-肉毒堿時，期望以高純度制造具生物活性的L-形式。高純度的L-肉毒堿能夠通過微生物法獲得。EP?0195944公開了一種微生物法，其中在生物反應器中借助于特定的微生物由巴豆甜菜堿(crotonobetain)和丁酸甜菜堿產生L-肉毒堿。獲得光學純L-肉毒堿與丁酸甜菜堿的混合物。為了除去丁酸甜菜堿，將終產物用甲醇和異丁醇重結晶。

另一種獲得基本上純的L-肉毒堿的微生物法公開于DD?296702中。通過L-肉毒堿的電滲析和重結晶，耗盡培養溶液中的L-肉毒堿。在該微生物法中，基本上不產生D-肉毒堿，因此不需要對映體分離步驟。利用溶劑對L-肉毒堿進行重結晶以除去其它物質。

利用非微生物法或非酶促法來獲得高純度L-肉毒堿更復雜。利用有機合成，通常獲得D-和L-肉毒堿的混合物。為了獲得純L-肉毒堿，DE?689?01?889T2教導在立體選擇性不對稱氫化反應中使用釕膦配合物。該配合物相對復雜且昂貴，因此不適用于在工業方法中大量制備L-肉毒堿。

因此，已開發了從L-和D-肉毒堿的混合物中分離L-肉毒堿的方法。通常這些方法基于利用具光學活性的酸將肉毒堿轉化成鹽，以及利用L-和D-肉毒堿具有的不同的物理性質(例如溶解度)將L-與D-肉毒堿分離。

在這一方面，DD?93?347公開了一種在樟腦酸、二苯甲酰基酒石酸或其組合的存在下從醇溶液中分離D-和L-肉毒堿的方法。由于鹽的不同溶解度，可將D-肉毒堿與L-肉毒堿分離。

DE?35?36?093公開了由外消旋混合物制備L-肉毒堿的方法，其中利用二苯甲酰基-L-酒石酸將D-和L-肉毒堿轉化成具光學活性的鹽，其后進行分級結晶。

然而，將肉毒堿轉化成具光學活性的鹽或酸的方法相對復雜，理由是它們包括添加分離劑和將其在分離工序后除去的步驟。這樣導致整個方法具有相對的時間效率和勞動效率。

本發明要解決的問題

本發明要解決的問題是提供能夠解決上述問題的制造L-肉毒堿的方法。

該方法應適于由包含L-和D-肉毒堿的對映體混合物制造高純度的L-肉毒堿。光學純度可藉此而顯著增加，且收率也應當高。

該方法應以簡易的方式進行。具體而言，應避免使用其后需被除去的其它化合物，例如具光學活性的助劑。此外，工序步驟的數目應相對少，且這些工序應該不需要復雜的裝置。總地來說，該方法應具有成本效率和勞動效率。

發明概述

出乎意料地，本發明要解決的問題通過權利要求所述的方法得到解決。整個說明書中公開了本發明進一步的實施方式。

本發明的主題是制造L-肉毒堿的方法，其包括以下步驟：

(a)提供在第一溶劑中包含至少5%(w/w)肉毒堿的溶液，其中所述肉毒堿是D-和L-肉毒堿的混合物，

(b)任選地用L-肉毒堿晶體對該溶液進行種晶，

(c)添加第二溶劑，L-肉毒堿在所述第二溶劑中不溶或溶解度低，

(d)分離包含L-肉毒堿的晶體。

肉毒堿是兩性離子，其包含羧酸基和季銨基。步驟(a)中使用的肉毒堿優選為該兩性離子性肉毒堿。然而，也可以使用鹽，例如氯化物鹽、硫酸鹽或硝酸鹽。步驟(a)中使用的肉毒堿優選不是肉毒堿與具光學活性的陰離子的鹽。

通過本發明的方法，以提高了的純度獲得L-肉毒堿。因此，本發明的方法也是純化L-肉毒堿的方法，或者是獲得高純度L-肉毒堿的方法，或者是提高L-肉毒堿的對映體過量的方法。

根據本發明，由包含D-和L-肉毒堿的溶液獲得晶態L-肉毒堿。在優選的實施方式中，步驟(a)中的溶液基本上由溶劑和肉毒堿組成。在本發明的方法中，L-肉毒堿的對映體過量(e.e.)被提高。優選地，對映體過量提高了多于1%或多于2%。對映體過量的增加取決于步驟(a)中初始溶液的對映體過量。對映體過量(e.e.)定義為各對映體的摩爾分數之間以百分率表示的絕對差異值。舉例來說，含有90%L-異構體和10%D-異構體的樣品的對映體過量為80%L-異構體。