[發明專利]具有改善的免疫原性的蛋白質基質疫苗

無效

• 申請號: 201080050412.6
• 申請日: 2010-09-09
• 公開（公告）號: CN102686238A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: K·P·基利恩;T·J·格里芬四世;A·薩納瓦斯蒂恩
• 申請（專利權）人: 馬特里瓦克斯研究和開發公司
• 主分類號: A61K39/09
• 分類號: A61K39/09;A61K39/00;A61K39/112
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 陳迎春;黃革生

相關申請的交叉引用

本申請主張2009年9月9日遞交的美國臨時專利申請系列號61/276,183的優先權，在此將其整個內容全部引用作為參考。

發明領域

本發明涉及免疫原性組合物、制造疫苗的方法以及疫苗給藥的方法。具體地，本發明涉及蛋白質莢膜基質疫苗，其特征在于目的抗原被包載在交聯的載體蛋白質基質中，其中控制蛋白質莢膜基質的顆粒尺寸以增加組合物的免疫原性。更具體地，本發明涉及消除了低分子量基質顆粒（例如，＜100nm直徑）的基質疫苗制劑。在制備為具有大于100nm直徑的平均顆粒尺寸直徑的基質疫苗制劑中獲得了免疫原性增加的優點，即考慮150nm、200nm、500nm、1微米、2微米或甚至更大的顆粒尺寸。

許多抗原，尤其是與病原體的莢膜層相關的那些抗原刺激很少或者不刺激免疫應答并且使產生針對那些抗原的有效疫苗的努力復雜化。莢膜是微生物的表面組分，其通常由有機化合物如碳水化合物、氨基酸或醇的聚合物所構成。莢膜的化學結構非常多樣。構成莢膜的單體單元（例如碳水化合物）可以以多種分子構型連接在一起并且可以進一步被磷酸鹽、氮、硫酸鹽以及其他化學修飾所取代。完整的微生物莢膜的低免疫原性使得微生物免于宿主免疫系統的效應子細胞的作用。莢膜也可以是毒性因子，其防止微生物被宿主巨噬細胞和多形核白細胞吞噬以及殺死。

針對莢膜的抗體通過將補體固定在微生物表面而提供針對包膜化的生物體的潛在防御，這可以造成它們被噬菌性宿主免疫細胞裂解或調理、攝取以及殺死。針對微生物莢膜的最有潛能的抗體是IgG抗體。莢膜抗原由于引發不需要T輔助細胞的免疫應答并且通常并未引發長效免疫記憶反應，因此它們通常被分類為非T依賴性的抗原。蛋白質與莢膜抗原的共價偶聯使得莢膜抗原為“T-依賴性的”，并且這種T-依賴性的抗原引發了輔助性T細胞介導的（T_h-依賴的）IgG反應。

研究了致使抗原更具免疫原性以及更理想地T-依賴性的多種方法。微生物表面多糖片段的分離通常提供了能夠引發將識別微生物莢膜中天然發生抗原的免疫應答的免疫原性抗原。也證明了抗原與載體蛋白的共價鏈接而提供的多價免疫原可以極大地增加抗原的免疫原性并且也促進理想的T-依賴性的免疫應答（或免疫記憶），該T-依賴性的免疫應答（或免疫記憶）造成針對具有抗原的微生物的后續感染的宿主保護。例如，非綴合的肺炎鏈球菌疫苗，如Merck的對于個體中的侵襲性肺炎鏈球菌疾病是有效的，然而它通常對于引發免疫記憶以及能允許終身免疫性及避免經常再免疫接種的理想的保護性免疫是無效的（例如，在嬰兒中）。綴合疫苗如Pfizer的其多個肺炎鏈球菌多糖抗原綴合到蛋白質“載體”上，被證明即使在2個月大的嬰兒中也具有高度的免疫原性，并且誘導T-依賴性的免疫性。

然而，盡管綴合疫苗在免疫原性上是有前途的，但是它們的制造可能極其困難復雜（并且昂貴），這極大地妨礙了它們對于世界上需要它們的所有患者以及患者群體的貢獻。例如，在的情形下，令用來提供綴合用的7種多糖抗原的各肺炎鏈球菌（S.pneumoniae）菌株在生物反應器中生長；收獲細胞；提取、純化多糖并水解到適當大小；然后將各抗原與蛋白質載體綴合；再純化綴合物，與通過相似方式制備的另外6種其他多糖-蛋白質復合體（綴合物）混合；最終將多-綴合混合物佐以明礬。預計在制造七價的疫苗時有超過200個GMP步驟。

近來，提出將蛋白質基質疫苗作為綴合疫苗的替代品。參見，美國專利公開2008-0095803，其在此通過引用作為參考。蛋白質基質疫苗并不是將目的抗原共價綴合到載體上，而是將抗原包載到載體蛋白質基質中，蛋白質基質疫苗是由在理想的抗原存在時通過交聯載體蛋白而制備的。避免了抗原與載體蛋白的顯著共價鏈接；相反，抗原通過在基質形成（交聯反應）期間被蛋白質載體包載而仍舊與基質結合。這樣的蛋白質基質疫苗顯示出比單獨使用抗原所制備的疫苗具有更高的免疫原性；并且蛋白質基質疫苗也可以實現在綴合疫苗中看到的那類免疫原性（以及T-依賴性的免疫性的誘導）。并且這種優點通過更少的生產綴合疫苗所需的處理步驟（例如，一半的步驟）以及復雜的綴合反應得以實現。

盡管蛋白質基質疫苗提供了若干優點，但是通過蛋白質基質疫苗引發的抗原特異性抗體的滴度通常顯著低于通過相應的綴合疫苗（如果可以得到）所引發的滴度。因此，提供一種增加蛋白質基質疫苗的免疫原性的手段從而開發這一新興技術的科學前景及制造及成本優勢是本領域持續存在的技術問題。持續需要具有增強的免疫原性或潛能的改良的蛋白質基質疫苗。

發明概述