[發明專利]抗體糖基化變體

有效

• 申請號: 201080049829.0
• 申請日: 2010-10-25
• 公開（公告）號: CN102770554A
• 公開（公告）日: 2012-11-07
• 發明（設計）人: J·羅;S·麥卡錫;T·S·拉朱;B·斯卡倫;T·斯平卡-多姆斯
• 申請（專利權）人: 詹森生物科技公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;A61K39/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 林毅斌;李進

背景技術

技術領域

本發明涉及對抗體的Fc序列和其他含Fc的分子的評價，更具體地講，本發明涉及制備、改變和使用抗體制劑和其他含Fc的分子以改變對蛋白酶的敏感性的方法。

關于本領域的討論

Fc域內的氨基酸修飾可具有可視為變構效應的作用，也就是說，從遠處影響Fc構象。具體地說，經證實，CH3域中的氨基酸置換會影響與Fc-γ受體的結合，所述受體會在兩條重鏈之間的鏈間二硫鍵下方(下絞鏈區)也就是在CH2域結合抗體(Shields?et?al.(2001)J?Biol?Chem?276：6591；Stavenhagen?et?al.(2007)Cancer?Res?67：8882(Shields等人，2001年，《生物化學雜志》，276卷，第6591頁；Stavenhagen等人，2007年，《癌癥研究期刊》，第67卷，第8882頁))。

在成熟抗體中，連接到Asn297的兩個復合雙分支低聚糖包埋在CH2域之間，形成與多肽主鏈的廣泛接觸。已經發現的是，它們的存在是抗體介導諸如ADCC的效應子功能所必需的(Lifely，M.R.，et?al.，Glycobiology?5：813-822(1995)；Jefferis，R.，et?al.，Immunol?Rev.163：59-76(1998)；Wright，A.and?Morrison，S.L.，supra(Lifely，M.R.等人，《糖生物學》，第5卷，第813-822頁，1995年；Jefferis，R.等人，《免疫學綜述》，第163卷，第59-76頁，1998年；Wright，A.和Morrison，S.L.，出處同上))。其他人和本專利申請人(WO2007005786)的研究已進一步證實，Fc區中這些天然附著的聚糖的低聚糖組分也會改變該多肽鏈各個非相鄰位點中的Fc受體結合親和力及蛋白酶敏感性(Raaju，S.T.2008?Curr?Op?Immunol?20：471-478(Raju，S.T.，2008年，《免疫學新觀點》，第20卷，第471-478頁)；WO2007024743)。

因此，隨著人們對抗體分子各種構象方面的深入理解以及建模和蛋白質工程技術的不斷成熟，如今可以靶向候選治療性抗體內的區域進行修飾，以為了特定用途或適應癥匹配期望的體內相互作用譜。這種修飾可提供改進的、安全性得到保持的抗體治療劑。

發明內容

本發明提供了經過修飾、糖基化的免疫球蛋白恒定域的組合物，其可用于工程化改造抗體或抗體類治療劑，例如包含這樣的Fc區的抗體或抗體類治療劑，所述Fc區具有一個或多個經工程化改造的、天冬酰胺(Asn)連接的糖基化位點(“N-糖基化”)。

在本發明的一個實施例中，第359位具有來自第361位的突變的N-糖基化位點和/或第419位具有來自第421位的突變的N-糖基化位點。另外，Asn297位處存在天然的Fc糖基化，在另一個實施例中可不存在天然的Fc糖基化。抗體衍生的構建體為源自或包括人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4序列的二聚蛋白結構。在一個方面，所述構建體在鉸鏈區中的第228、234或235位(Kabat?EU編號)含有氨基酸置換。

本發明的另一目標是提供基于經修飾的糖基化免疫球蛋白恒定域的、與具有類似未修飾免疫球蛋白恒定域的化合物相比性質有所改進的化合物；所述性質包括但不限于蛋白酶敏感性、血清半衰期和Fc受體結合。

本發明又一個目標是提供用于增強糖基化抗體制劑抵抗蛋白酶切割的能力的組合物和方法，由此提供用于治療與蛋白酶含量升高相關的病理狀況(例如癌癥)的抗體制劑。在本方法的另一個實施例中，含糖基化Fc的蛋白質為抗體，優選地為治療性單克隆抗體。其切割活性要抑制的蛋白酶選自胃蛋白酶、纖溶酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、基質金屬蛋白酶、絲氨酸內肽酶和半胱氨酸蛋白酶，其來源于宿主或病原體，病原體可以為寄生蟲、細菌或病毒。在一個具體的實施例中，蛋白酶是基質金屬蛋白酶，所述基質金屬蛋白酶選自明膠酶A(MMP2)、明膠酶B(MMP-9)、基質金屬蛋白酶-7(MMP-7)、溶基質蛋白酶(MMP-3)和巨噬細胞彈性蛋白酶(MMP-12)。所述修飾可引入到抗體序列中。本發明所公開的經修飾的構建體對生理相關蛋白酶表現出更強抗性。

附圖說明