[發明專利]用于細胞刺激隨后進行治療性免疫的乙肝病毒抗原制劑

無效

• 申請號: 201080048991.0
• 申請日: 2010-09-28
• 公開（公告）號: CN102665687A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發明（設計）人: J·阿古拉魯比多;Y·洛拜納馬托;D·赫南德茲尹古安佐;H·特魯吉洛佩爾茲;F·D·L·M·弗雷爾阿爾梅達;V·L·穆茲歐岡薩雷斯;E·潘頓阿利亞斯;S·岡薩雷斯布蘭克;R·烏比塔戈麥斯;G·E·吉倫涅托;L·S·赫里拉馬丁內斯
• 申請（專利權）人: 遺傳工程與生物技術中心
• 主分類號: A61K9/14
• 分類號: A61K9/14;A61K39/29;A61P31/12
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 李程達

技術領域

本發明涉及醫藥，特別是通過轉移已經經過乙肝病毒(HBV)的表面抗原(HBsAg)和核衣殼抗原(HBcAg)的制劑刺激的細胞而進行的治療性免疫。通過包含這些抗原的混合物的制劑誘導細胞刺激，所述抗原從懸浮液中沉淀，其比例是基于在被動免疫治療應用之前實現最大化細胞刺激而選擇的。

背景技術

世界衛生組織(WHO)認為世界上三分之一以上的人口已經被乙肝病毒(HBV)感染。認為5％至10％的成人和高達90％的被感染的新生兒是以持續方式產生感染，在世界水平而言有350,000,000人口攜帶該病毒。長時間段內HBV的持續復制導致進行性的肝病，其在大約25％的攜帶者中進展為肝硬化或肝癌。認為每年有一百萬以上的死亡與不同進展形式的該病毒的感染相關(Zuckerman?JN.J?MED?VIROL?2006；78：169-177)。

使用綴合于聚乙二醇(PEG)的干擾素α(IFN-α)或其變體和核苷或核苷酸、例如拉米夫定、阿德福韋-二匹伏、恩替卡韋和Telbivudina進行的治療構成了治療慢性乙肝(CHB)的現有技術。一般地，就持續消除病毒而言，這些藥物有效性差，并且它們的使用與嚴重的次級效應相關(Osborn?MK，et?to?the?one.J?ANTIMICROB?CHEMOTHER.2006；57：1030-34)。

具有高百分率的預防乙肝的有效性的疫苗的開發構成了世界水平的預防醫學的重大成就。目前，超過150個國家在免疫項目中向兒童、青少年和風險群體提供抗乙肝疫苗。第一代疫苗是基于從無癥狀攜帶者的血漿獲得的純化且滅活的HBsAg。這些制劑是免疫原性的；但是，它們迅速被在酵母中產生的具有更高安全性的重組疫苗替代(Zuckerman?JN.J?MED?VIROL?2006；78：169-177)。目前，研究聚焦于免疫原性更高、更有效的制劑的開發，起始于強有力的佐劑的導入，但是這些制劑對于治療慢性感染未獲成功。

從上世紀90年代開始，進行了旨在評估使用疫苗接種來治療HBV慢性感染的研究。該治療策略已經受到了強烈關注，其來自證實了免疫應答對于控制該病毒的基礎性作用的證據。研究此課題的研究組尋求顛覆對于HBV的免疫耐受態，從施用疫苗制劑開始(Hui?CK，et?al.INT?J?MED?SCI.2005；2：24-29)。

最近，以治療目的使用常規的預防性疫苗在免疫治療領域獲得的結果提示了研究使用更強有力的、包含新的抗原、佐劑、新施用途徑和合理的組合治療的疫苗候選物的必要性(Pol?S，et?al.Expert?Rev?Vaccines?2006；5：707-16)。設計最佳疫苗候選物時應牢記與抗原性成分相關的方面，以及與制劑的佐劑成分相關的方面。

遺傳工程與生物技術中心(CIGB)使用酵母“巴斯德畢赤酵母(Pichia?pastoris)”作為宿主細胞生產了重組HBsAg。該抗原是古巴從九十年代初期批準和使用的抗乙肝疫苗的一部分(Muzio?V，et?al.European?patent?No.EP?480525)。

HBsAg具有在健康人中誘導強烈的特異性免疫應答(抗體的和輔助性T細胞的)的能力。另外，已經證明HBsAg表位可以由I類主要組織相容性系統(HLA)的分子呈遞，即使是當該蛋白像異源蛋白一樣被抗原呈遞細胞加工的時候。該性質允許非佐劑化的HBsAg通過經替代性加工途徑產生的表位誘導細胞毒性應答，允許HBsAg特異性細胞毒性細胞庫的擴增(Bertoletti?A，J?Hepatol?2003；39：115-124)。然而，該抗原在治療性免疫中的使用未在II期研究中產生可重現的益處。目前，尚不存在針對HBV慢性感染的治療性疫苗。

用于促進慢性患者中的免疫應答的策略之一是使用HBcAg作為疫苗抗原。HBcAg的氨基酸序列的顯著特性是在羧基末端存在富含精氨酸的區域。該區域具有在天然顆粒中連接前基因組核糖核酸(RNA)的功能。在重組顆粒的情況下，該區域與細菌RNA(大小為30-3000個核苷酸)結合，這賦予了重要的免疫性質(Riedl?P.J?Immunol?2002；168：4951-59)。