[發明專利]用于改進重組蛋白表達的方法

在審

• 申請號: 201080044475.0
• 申請日: 2010-08-06
• 公開（公告）號: CN102648285A
• 公開（公告）日: 2012-08-22
• 發明（設計）人: 豪爾·羅伯特·葛萊罕·克拉克
• 申請（專利權）人: CMC依科斯生技制品公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07H21/04
• 代理公司: 北京銀龍知識產權代理有限公司 11243
• 代理人: 鐘晶;於毓楨

1.一種用于增加宿主細胞中異源蛋白表達的方法，所述方法包括以下步驟：在允許蛋白表達的條件下培養包含編碼所述異源蛋白的第一異源多核苷酸序列的所述宿主細胞，所述第一多核苷酸在載體上編碼，所述宿主細胞進一步包含具有針對選擇標記蛋白的蛋白編碼序列的第二多核苷酸序列，所述第二多核苷酸與編碼所述選擇標記蛋白的野生型多核苷酸相比具有序列修飾，所述序列修飾降低由所述第二多核苷酸編碼的mRNA的翻譯效率，所述序列修飾、具有所述序列修飾的所述第二多核苷酸和所述野生型多核苷酸編碼針對所述選擇標記蛋白的相同氨基酸序列。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述第一多核苷酸和所述第二多核苷酸在單個載體中。

3.根據權利要求2所述的方法，其中所述第一多核苷酸和第二多核苷酸各自受不同啟動子的轉錄控制。

4.根據權利要求2所述的方法，其中所述第一多核苷酸和第二多核苷酸各自受單個啟動子的轉錄控制。

5.根據權利要求1所述的方法，其中所述第一多核苷酸和所述第二多核苷酸在獨立載體中。

6.根據權利要求1所述的方法，其中所述修飾在編碼所述選擇標記蛋白的所述第二多核苷酸的非翻譯區中。

7.根據權利要求6所述的方法，其中所述修飾在5′非翻譯區中。

8.根據權利要求6所述的方法，其中所述修飾在3′非翻譯區中。

9.根據權利要求1所述的方法，其中所述修飾在編碼所述選擇標記蛋白的所述基因的蛋白編碼區中。

10.根據權利要求9所述的方法，其中所述修飾具有針對所述選擇標記基因的所述蛋白編碼區的起始密碼子的25、20、15、10或5個密碼子。

11.根據權利要求1所述的方法，其中所述第二多核苷酸序列中的所述蛋白編碼序列包含至少一個被修飾的密碼子，所述密碼子并非編碼所述選擇標記蛋白的野生型多核苷酸中的野生型密碼子，所述被修飾的密碼子作為密碼子，并非是針對所述宿主細胞編碼的所述氨基酸的偏好密碼子。

12.根據權利要求11所述的方法，其中所述第二多核苷酸序列中的所述蛋白編碼序列包含至少一個被修飾的密碼子，所述密碼子并非編碼所述選擇標記蛋白的野生型多核苷酸中的野生型密碼子，所述被修飾的密碼子作為密碼子，是針對所述宿主細胞編碼的所述氨基酸的最不偏好密碼子。

13.根據權利要求1所述的方法，其中所述第二多核苷酸序列中的所述蛋白編碼序列包含至少一個被修飾的密碼子，所述密碼子并非編碼所述選擇標記蛋白的野生型多核苷酸中的野生型密碼子，且所述修飾在所述mRNA的二級結構中引入了降低所述mRNA的翻譯效率的變化。

14.根據權利要求1所述的方法，其中所述第二多核苷酸序列中的所述蛋白編碼序列包含至少一個被修飾的密碼子，所述密碼子并非編碼所述選擇標記蛋白的野生型多核苷酸中的野生型密碼子，且所述修飾增加所述mRNA中的密碼子配對。

15.根據權利要求1所述的方法，其中所述第二多核苷酸序列中的所述蛋白編碼序列包含至少一個被修飾的密碼子，所述密碼子并非編碼所述選擇標記蛋白的野生型多核苷酸中的野生型密碼子，且所述修飾改變所述mRNA的G+C含量。

16.根據權利要求15所述的方法，其中所述修飾增加所述mRNA的G+C含量。

17.根據權利要求16所述的方法，其中所述G+C含量被改變1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％。