[發明專利]用于Western印跡的納米纖維膜及其制備方法

在審

• 申請號: 201080043816.2
• 申請日: 2010-09-16
• 公開（公告）號: CN102574067A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 鞠重基;趙紀云;金燦;徐尚哲;金哲賢;徐寅踴;李承勳;金允譓;樸奏映
• 申請（專利權）人: 阿莫麥迪有限公司;阿莫綠色技術有限公司
• 主分類號: B01D67/00
• 分類號: B01D67/00;B01D71/00;C08J7/12;G01N33/53
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;陰亮

技術領域

本發明涉及用于Western印跡的膜及其制備方法，所述膜所具有的三維開放式孔結構的平均孔徑為0.1μm至1.0μm以及其厚度為30μm至200μm，其中該用于Western印跡的膜通過使由電紡絲而獲得的平均纖維直徑為50nm至1000nm的納米纖維經過熱板壓延過程而制備。

背景技術

目前常用的用于Western印跡的膜包括由硝化纖維(NC)、尼龍或聚偏1，1-二氟乙烯(下文稱為“PVdF”)聚合物制成的多孔膜。

特別地，基于PVdF的膜主要用作Western印跡用膜，因為它們與基于硝化纖維或基于尼龍的膜相比具有優異的蛋白結合靈敏性、膜強度和操作性質。

Western印跡是用于檢測組織均漿或提取物的給定樣品中特異性蛋白的技術。其為用于從各種蛋白混合物中檢測任何特異性蛋白的技術，并且是通過使用抗待檢測蛋白的抗體來引起抗原-抗體反應從而檢測蛋白存在的方法。

Western印跡還用于通過多肽或蛋白三維結構的尺寸來分離天然凝膠或變性蛋白。

在Western印跡中，將從細胞或組織中提取的蛋白與樣品緩沖液混合，并放置在由丙烯酰胺制成的分子篩上，然后進行電泳。然后，在樣品緩沖液中包含的十二烷基硫酸鈉(SDS)使蛋白攜帶負(-)電荷，以便蛋白被吸引至正(+)電荷。同時，SDS分子篩干涉蛋白移動，從而小分子快速移動并且大分子慢速移動，因此形成各種尺寸的帶。當將膜放置在根據尺寸而分離的凝膠上并在其上施加電流時，蛋白轉移至膜?？勾龣z測的特異性蛋白的抗體與膜結合，然后對該抗體特異性的第二抗體與該膜結合，并且通過X射線將生成的顯色反應成像。

用于該目的的膜為多孔膜，其由能與蛋白疏水作用的聚合物(例如，PVdF)制成并具有0.2μm至0.45μm的平均孔徑。

該多孔膜由諸如通過相分離的濕法、干法或干-濕法澆鑄的方法而制備，其中將溶劑和聚合物引入諸如水的納米溶劑中。然而，多孔膜制備的成本高并且難于大量制備。

此外，若多孔膜通過相分離而制備，則缺點在于孔結構分布不均勻。例如，PVdF膜需要在使用前通過將其浸入甲醇中來進行使膜部分親水化的過程，由此使膜與緩沖溶液的相容性最大化。若不進行該親水化過程，則由于蛋白未充分地吸收在膜上而降低膜的靈敏性。

該甲醇預處理過程能顯著降低膜的強度而導致裂縫并形成導致背景的氣泡，因此使其難于準確地檢測期望的蛋白。

因此，本發明人已使用電紡絲過程來以簡單且便捷的方式制備昂貴的納米纖維膜，其為具有人工可控的孔結構，并由具有最大表面積的納米纖維制成且甚至在其未經過甲醇預處理過程時與現有膜相比具有優異的靈敏性，由此完成了本發明。

發明概述

技術問題

因此，本發明的目的是提供用于Western印跡的膜及其制備方法，所述膜使用電紡絲過程而制備、由具有最大表面積的納米纖維網組成以消除對甲醇預處理過程的需求，并由此具有無背景的優異靈敏性。

本發明的另一目的是提供用于Western印跡的膜及其制備方法，所述膜由于通過進行等離子表面改性來使膜親水化而具有更優異的靈敏性。

技術方案

為實現上述目的，根據本發明的一個方面，提供了制備用于Western印跡的膜的方法，所述方法包括如下步驟：將疏水性聚合物材料溶解在溶劑中以制備紡絲溶液；使紡絲溶液經歷紡絲過程以獲得疏水性聚合物納米纖維網；以及將納米纖維網壓延以獲得用于Western印跡的膜。

本發明的方法還包括進行表面改性以賦予壓延的納米纖維網親水性的步驟。

用于本發明的疏水性聚合物材料可以為例如選自聚偏1，1-二氟乙烯(PVdF)、尼龍、硝化纖維素、聚氨基甲酸酯(PU)、聚碳酸酯(PC)、聚苯乙烯(PS)、聚乳酸(PLA)、聚丙烯腈(PAN)、聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)、聚乙烯亞胺(PEI)、聚甲基吖丙啶(PPI)、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、聚氯乙烯(PVC)、聚乙烯乙酸酯(PVAc)和聚苯乙烯二乙烯基苯共聚物中的一種或者兩種或多種的混合物。

用于本發明的溶劑可以為選自二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺(DMAc)、四氫呋喃(THF)、丙酮、乙醇、氯仿、二甲基亞砜(DMSO)、二氯甲烷、乙酸、甲酸、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、氟代醇和水中的一種或多種。

形成納米纖維網的納米纖維的直徑優選為50nm至1000nm。

紡絲過程可以選自電紡絲、電霧化、電吹制紡絲、離心電紡絲、快速電紡絲、氣泡電紡絲、熔融電紡絲和非針電紡絲中的任一種。