[發(fā)明專利]人皮膚外植體培養(yǎng)系統(tǒng)及其用途

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201080038259.5
• 申請(qǐng)日: 2010-08-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102482642A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-05-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: N·陳;Y·胡;C·B·林;A·帕帕斯;M·塞伯格
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 強(qiáng)生消費(fèi)者公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/071
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/071;G01N33/50
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 余穎

相關(guān)專利申請(qǐng)的交叉引用

本專利申請(qǐng)要求提交于2009年8月21日的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)61/235,923的優(yōu)先權(quán)。上述相關(guān)美國(guó)專利申請(qǐng)的全部公開(kāi)內(nèi)容據(jù)此以引用方式并入本文以用于所有目的。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及人皮膚外植體培養(yǎng)系統(tǒng)以及使用所述系統(tǒng)測(cè)試組合物對(duì)皮膚代謝活性的作用。

背景技術(shù)

體外模型系統(tǒng)一直是基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究的重要構(gòu)成部分。由于最新的歐盟法規(guī)禁止使用動(dòng)物測(cè)試化妝品成分，因此為皮膚建立此類(lèi)模型系統(tǒng)越發(fā)重要。

人皮膚外植體已在培養(yǎng)條件下研究50多年，主要研究領(lǐng)域?yàn)楸砥ど飳W(xué)和上皮癌研究。然而，這些模型系統(tǒng)主要針對(duì)表皮活性，無(wú)法重現(xiàn)真皮層和脂肪層的代謝活性以及組織結(jié)構(gòu)。

論文“Repair?of?UVA-Induced?Elastic?Fiber?and?Collagen?Damage?by?0.05％Retinaldehyde?Cream?in?an?ex?vivo?Human?Skin?Model”(在體外人皮膚模型中使用0.05％視黃醛霜?jiǎng)┬迯?fù)UVA誘導(dǎo)的彈性纖維和膠原損傷)(由S.Boisnic等人提交于1998年10月7日在第七屆歐洲皮膚性病學(xué)會(huì)年會(huì)(Nice，F(xiàn)rance)召開(kāi)的衛(wèi)星研討會(huì)的、題名為“New?Concepts?for?Topical?Use?of?Natural?Retinoids，Retinaldehyde?in?Perspective”(天然類(lèi)視色素、視黃醛局部用藥前景的新概念)的論文集(編輯：J.-H.Saurat，Geneva，Switzerland；A.Vahlquist，Uppsala，Sweden))討論了視黃醛對(duì)皮膚外植體培養(yǎng)物中的膠原的作用。

最近發(fā)表的論文“Effect?of?Green?Coffea?Arabica?L.Seed?Oil?on?Extracellular?Matrix?Components?and?Water-channel?Expression?in?in?vitro?and?ex?vivo?Human?Skin?Models”(Journal?of?Cosmetic?Dermatology，2009?Mar；8(1)：56-62，Velazquez?Pereda?Mdel?C?et?al.)(綠咖啡豆種子油對(duì)體內(nèi)和體外人皮膚模型中細(xì)胞外基質(zhì)組分和水通道蛋白表達(dá)的作用(《美容皮膚病學(xué)雜志》，2009年3月；第8卷第1期，第56-62頁(yè)，Velazquez?Pereda?Mdel?C等人))的作者沒(méi)能說(shuō)明在外植體培養(yǎng)物中起到的作用。因此，他們用人皮膚組織切片與其受試試劑共同溫育，再進(jìn)行免疫染色，以證實(shí)在合成膠原、彈性蛋白和其他細(xì)胞外基質(zhì)組分時(shí)的刺激作用。

不管這些論文的教導(dǎo)內(nèi)容如何，一直需要這樣的人皮膚外植體模型系統(tǒng)：其最能代表所有皮膚區(qū)室的生理復(fù)雜性、代謝活性和結(jié)構(gòu)完整性。

還需要增加所培養(yǎng)的活檢組織的表面積，以便能夠研究試劑和組合物的局部施用。直徑4mm的標(biāo)準(zhǔn)活檢組織大小不支持此類(lèi)研究。“A?Human?Full-Skin?Culture?System?for?Interventional?Studies”(Eplast.2009；9：e5.Published?online?2009?January?9，by?Lars?Steinstraesser?et?al.)(用于干預(yù)性研究的人全層皮膚培養(yǎng)系統(tǒng)(Eplast.2009；第9卷第e5頁(yè)，由Lars?Steinstraesser等人于2009年1月9日網(wǎng)上發(fā)表))描述了較大皮膚活檢組織的培養(yǎng)并證實(shí)皮膚外植體的組織學(xué)特性保留了4周。然而，在該外植體系統(tǒng)的轉(zhuǎn)基因表達(dá)模式研究中，卻發(fā)現(xiàn)并不與體內(nèi)觀察到的代謝活性類(lèi)似。

一直需要這樣的人皮膚外植體模型系統(tǒng)：其最能代表所有皮膚區(qū)室的生理復(fù)雜性、代謝活性和結(jié)構(gòu)完整性，并且具有足夠的表面積以便能夠用受試試劑和組合物進(jìn)行局部處理。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明涉及人皮膚外植體培養(yǎng)系統(tǒng)，所述培養(yǎng)系統(tǒng)包含置于特定培養(yǎng)基中的直徑高達(dá)約25mm的人皮膚活檢組織，所述培養(yǎng)基包含約40體積％至約60體積％的達(dá)爾伯克氏改良伊格爾培養(yǎng)基、約40體積％至約60體積％的F-12營(yíng)養(yǎng)混合物、約0.5重量％至約5重量％的胎牛血清、1至20μg/ml的胰島素、1至20ng/ml的氫化可的松、1至20ng/ml的表皮生長(zhǎng)因子以及1×抗生素-抗真菌溶液。