[發明專利]人皮膚外植體培養系統及其用途

無效

• 申請號: 201080038259.5
• 申請日: 2010-08-18
• 公開（公告）號: CN102482642A
• 公開（公告）日: 2012-05-30
• 發明（設計）人: N·陳;Y·胡;C·B·林;A·帕帕斯;M·塞伯格
• 申請（專利權）人: 強生消費者公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;G01N33/50
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 余穎

1.一種人皮膚外植體培養系統，所述培養系統包含置于培養基中的直徑高達約25mm的人皮膚活檢組織，所述培養基包含：

約40體積％至約60體積％的達爾伯克氏改良伊格爾培養基；

約40體積％至約60體積％的F-12營養混合物；

約0.5重量％至約5重量％的胎牛血清；

1至20μg/ml的胰島素；1至20ng/ml的氫化可的松；1至20ng/ml的表皮生長因子；以及1×抗生素-抗真菌溶液。

2.根據權利要求1所述的培養系統，包含約50體積％的達爾伯克氏改良伊格爾培養基，約50體積％的F-12營養混合物以及約2重量％的胎牛血清。

3.根據權利要求1所述的培養系統，包含約10ng/ml的表皮生長因子。

4.根據權利要求1所述的培養系統，在約32℃至約37℃下溫育。

5.根據權利要求1所述的培養系統，在約32℃下溫育。

6.根據權利要求1所述的培養系統，在約32℃下溫育24小時后再在約37℃下溫育。

7.一種測定組合物在局部施用到皮膚時的作用的方法，包括：

將直徑高達約25mm的皮膚活檢組織培養于培養基中，所述培養基包含：

約40體積％至約60體積％的達爾伯克氏改良伊格爾培養基；

約40體積％至約60體積％的F-12營養混合物；

約0.5重量％至約5重量％的胎牛血清；

1至20μg/ml的胰島素；1至20ng/ml的氫化可的松1至20ng/ml的表皮生長因子；以及1×抗生素-抗真菌溶液，

從而構建皮膚外植體培養系統；

將所述組合物局部施用到所述皮膚活檢組織上；以及

分析所述皮膚活檢組織對所述組合物的生物學響應。

8.根據權利要求7所述的方法，其中所述培養系統包含約10ng/ml的表皮生長因子。

9.根據權利要求7所述的方法，其中所述培養系統在約32℃下溫育。

10.根據權利要求7所述的方法，其中所述培養系統在約32℃至約37℃下溫育。

11.根據權利要求7所述的方法，其中所述培養系統在約32℃下溫育24小時后再在約37℃下溫育。

12.根據權利要求7所述的方法，其中所述分析步驟為真皮分析，所述真皮分析包括通過選自以下的方法監測彈性蛋白纖維生成：LUNA染色；對彈性蛋白或彈性蛋白輔助蛋白的基因進行的QPCR或轉錄分析；對彈性蛋白或彈性蛋白輔助蛋白的基因進行的蛋白檢測；組織學染色；以及免疫組織化學染色。

13.根據權利要求7所述的方法，其中所述分析步驟為真皮分析，所述真皮分析包括通過選自以下的方法監測膠原合成：不同膠原基因的轉錄；不同膠原蛋白的蛋白檢測；組織學染色；以及免疫組織化學染色。

14.根據權利要求7所述的方法，其中所述分析步驟為皮膚脂肪層的分析，所述分析包括用脂肪細胞分化試劑處理后對甘油三酯含量進行生化分析以監測脂肪生成。

15.根據權利要求7所述的方法，其中所述分析步驟為皮膚脂肪層的分析，所述分析包括在使用促脂肪生成試劑后測定游離甘油的釋放以證實脂肪分解。

16.根據權利要求7所述的方法，其中所述分析步驟為皮膚脂肪層的分析，所述分析包括通過選自以下的方法監測瘦素代謝：所述瘦素基因的轉錄；分泌瘦素的蛋白檢測；以及免疫組織化學染色。