[發明專利]人免疫缺陷病毒1型(HIV)檢測方法及其試劑盒

無效

• 申請號: 201080031024.3
• 申請日: 2010-07-07
• 公開（公告）號: CN102625851A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 井上雅文;黃恩得
• 申請（專利權）人: 新加坡科技研究局;陳篤生醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/70
• 代理公司: 北京金信立方知識產權代理有限公司 11225
• 代理人: 朱梅;徐琳

技術領域

本發明涉及引物、探針以及使用這樣的引物和/或探針檢測人免疫缺陷病毒1型(HIV)的存在的方法和試劑盒。

背景技術

HIV是世界上最嚴重的傳染性疾病之一并且是全球廣泛流行的，2009年11月的最近的世界衛生組織的報告稱全世界約有三千三百四十萬感染患者，并且約有2百萬在2008年死亡。WHO也提出“抗擊HIV/AIDS”作為第六個千年發展目標(ttp://www.who.int/mdg/en/)。

為了有效的治療，尤其是在低收入和中等收入的發展中國家，這種全球廣泛流行病遇到了空前的努力。到2007年12月為止，這些國家中平均有三百萬帶有HIV-1的人接受抗逆轉錄病毒的治療，其中只有31％的人需要這種治療。隨著HIV-1病例的逐年增長和需要測試的人的數量的緩慢增長，預計到2010年在發展中國家會有約七百萬個人接受治療。

HIV-1感染的早期檢測是很重要的從而能夠盡早開始治療。HIV-1病毒檢測也是診斷早期母親-對-孩子傳播病毒的唯一手段。HIV-1病毒定量(即病毒載量)是對治療的長期反應的最敏感的預測標志，因為還沒有能夠代替監測治療反應的病毒載量的替代標志。在大多數情況下，對于不能檢測出水平的病毒抑制是許多隨機治療試驗的主要終點(primary?endpoint)和許多治療指南中的重要目標。病毒抑制使治療耐性發展的風險減至最小。

因為大多數HIV-1感染者居住在發展中國家，由于需要大量的實驗室設施、經過培訓的人員和財務費用，因此這些國家進行病毒載量檢測受限，許多HIV-1感染者忍受感染而沒有尋求治療，因為他們不知道他們的感染。實時PCR測定也需要試劑冷藏、多個房間以防止污染，并且許多用于各種步驟的昂貴的儀器也進一步妨礙了病毒載量監測的進行。

例如，每項測定的費用為大約US$150并且每個樣本的基因分型的費用為約US$550。病毒載量監測的平均頻率是每個病人每年0.7次病毒載量，必需的治療-監測工具總體上利用不足。一些中心開發了內部(in-house)HIV定量測定從而努力想提高處理量并降低成本。多項研究已經進行證明內部病毒載量定量和基因分型是可行的并且低廉很多。例如，報道稱，每個運行中病毒載量定量的費用低至20英鎊并且基因分型另加35英鎊。然而，這種策略中潛在的限制之一是需要用于內標病毒培養的生物安全水平3(BSL3)級實驗室。

發明內容

本發明由所附的獨立權利要求限定。本發明的可選特征由所附的從屬權利要求限定。特別是，本發明陳述了上述問題，并且提供了用于更加有效地檢測和定量患者樣品中HIV-1的方法中的高度靈敏和特異的寡聚核苷酸、其片段和/或衍生物。在HIV-1的檢測中引物和/或探針可以是靈敏和特異的，并可以為確定HIV-1感染和/或與此相關的疾病狀態提供快速和經濟的診斷和預后試劑。這些引物提供了一種廉價、快速和更精確的HIV-1測試的手段。特別是，這些引物提供了一種負擔得起的及時現場護理HIV-1定量測定，其僅利用常規增強的BSL2裝置即可比得上當前的商業試劑盒，因此增加了具有更加負擔得起的試劑盒的病毒載量測試途徑。

根據第一個方面，本發明提供了一種分離的寡聚核苷酸，其包括選自SEQ?ID?NO：1到SEQ?ID?NO：3、其片段、衍生物、突變和互補序列中的至少一種核苷酸序列，基本上由選自SEQ?ID?NO：1到SEQ?ID?NO：3、其片段、衍生物、突變和互補序列中的至少一種核苷酸序列組成，或者由選自SEQ?ID?NO：1到SEQ?ID?NO：3、其片段、衍生物、突變和互補序列中的至少一種核苷酸序列組成。所述寡聚核苷酸可以能夠與HIV-1結合和/或從HIV-1擴增。

根據另一個方面，本發明提供了至少一對寡聚核苷酸，其包含至少一種正向引物和至少一種反向引物，其中，所述正向引物包括SEQ?ID?NO：1、其片段、衍生物、突變或者互補序列，基本上由SEQ?ID?NO：1、其片段、衍生物、突變或者互補序列組成，或者由SEQ?ID?NO：1、其片段、衍生物、突變或者互補序列組成，以及所述反向引物包括SEQ?ID?NO：2、其片段、衍生物、突變或者互補序列，基本上由SEQ?ID?NO：2、其片段、衍生物、突變或者互補序列組成，或者由SEQ?ID?NO：2、其片段、衍生物、突變或者互補序列組成。

根據又一個方面，本發明提供了至少一組寡聚核苷酸，其包含根據本發明任一方面的一對寡聚核苷酸和至少一種探針。