[發(fā)明專利]顯示出縮短的生物學(xué)活性的神經(jīng)毒素

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201080027593.0
• 申請日: 2010-07-01
• 公開（公告）號: CN102471765A
• 公開（公告）日: 2012-05-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: F·霍夫曼;J·弗雷韋特
• 申請（專利權(quán)）人: 莫茨制藥有限及兩合公司
• 主分類號: C12N9/52
• 分類號: C12N9/52;C12N1/21;C12N15/63;C07K14/33;C07K16/12;A61K38/48;A61K31/713;C12P21/02
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所 11247
• 代理人: 柴云峰;黃革生

本發(fā)明涉及制藥領(lǐng)域。具體地，預(yù)期編碼神經(jīng)毒素多肽的多核苷酸，所述多肽在受試者中顯示出生物學(xué)效應(yīng)減少的持續(xù)時間，其中所述多肽在輕鏈中包含至少一個降解信號，以及包含所述多核苷酸的載體和宿主細(xì)胞，由此編碼的多肽，和特異性地與所述多肽結(jié)合的抗體。此外，本發(fā)明涉及包含所述多核苷酸和多肽的藥物以及該藥物特定的治療應(yīng)用。此外，本發(fā)明預(yù)期用于所述多肽和藥物生產(chǎn)的方法。

肉毒桿菌和破傷風(fēng)梭菌產(chǎn)生高效的神經(jīng)毒素，即分別為肉毒毒素(BoNTs)和破傷風(fēng)毒素(TeNT)。這些梭菌神經(jīng)毒素(CNTs)與神經(jīng)元細(xì)胞特異性地結(jié)合并且干擾神經(jīng)遞質(zhì)釋放。每種毒素被合成為無活性的未加工的約150kDa的單鏈蛋白。翻譯后加工涉及二硫鍵的形成和細(xì)菌蛋白酶的有限蛋白酶解(切割)。活性的神經(jīng)毒素由兩條鏈組成，它們是通過二硫鍵連接的約50kDa的N端輕鏈和約100kDa的重鏈。CNTs由三個結(jié)構(gòu)域組成，即催化輕鏈，包括易位結(jié)構(gòu)域(N端的一半)的重鏈和受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(C端的一半)，見Krieglstein?1990，Eur?J?Biochem?188，39；Krieglstein1991，Eur?J?Biochem?202，41；Krieglstein?1994，J?Protein?Chem?13，49。肉毒桿菌神經(jīng)毒素以分子復(fù)合體形式合成，其包含150kDa的神經(jīng)毒素蛋白和相關(guān)的無毒性的復(fù)合蛋白。基于梭菌菌株和不同的神經(jīng)毒素血清型，復(fù)合體的大小在300kDa至900kDa的范圍內(nèi)變化。在這些復(fù)合體中的復(fù)合蛋白穩(wěn)定神經(jīng)毒素并且保護(hù)其免于降解，見Chen?1998，Infect?Immun?66(6)：2420-2425。

肉毒桿菌分泌七種抗原性不同的血清型，其被稱作肉毒桿菌神經(jīng)毒素(BoNT)的A至G型。全部血清型和破傷風(fēng)梭菌分泌的相關(guān)破傷風(fēng)神經(jīng)毒素(TeNT)是Zn²⁺內(nèi)切蛋白酶，所述Zn²⁺內(nèi)切蛋白酶通過裂解SNARE蛋白封閉突觸的胞吐作用，見Couesnon，2006，Microbiology，152，759。CNTs在肉毒中毒中引起可見的弛緩性肌肉麻痹，見Fischer?2007，PNAS?104，10447。

盡管它具有毒性作用，肉毒桿菌毒素已經(jīng)用于很多疾病或病癥的治療劑。在1989年肉毒桿菌毒素血清型A在美國被批準(zhǔn)用于人的斜視、瞼痙攣和其他的病癥的治療。它可作為肉毒桿菌毒素A蛋白復(fù)合體通過商業(yè)途徑得到，例如以商品名BOTOX(Allergan?Inc)或者商品名DYSPORT(Ipsen?Ltd)獲得。為了治療應(yīng)用，直接將復(fù)合體注射入待治療的肌肉中。在生理pH下，毒素從蛋白復(fù)合體中釋放出來，并且產(chǎn)生了所期望的藥理學(xué)效應(yīng)。一種改進(jìn)的非復(fù)合體的神經(jīng)毒素A多肽制劑以商品名XEOMIN(Merz?Pharmaceuticals?GmbH)獲得。肉毒桿菌毒素的效應(yīng)只是暫時的，這是需要肉毒桿菌毒素的重復(fù)施用以維持治療效果的原因。

梭菌神經(jīng)毒素減弱隨意肌強(qiáng)度并且是斜視、包括頸肌張力障礙的灶性張力障礙，以及良性自發(fā)性瞼痙攣的有效的治療劑。已經(jīng)進(jìn)一步地顯示梭菌神經(jīng)毒素減輕單側(cè)面部痙攣和局限性痙攣，并且，此外，其對多種其他的適應(yīng)癥如胃腸病癥、多汗以及美容除皺是有效的，見Jost?2007，Drugs?67，669。

然而，對于醫(yī)學(xué)狀況或疾病如傷口愈合、骨的固定和腱斷裂治療、外科手術(shù)后固定，特別用于痔切除術(shù)、牙植入物的引入或者髖關(guān)節(jié)置換術(shù)(內(nèi)假體)、膝關(guān)節(jié)形成術(shù)、眼科手術(shù)、痤瘡或者易激腸疾病，減弱肌肉強(qiáng)度和收縮也是所希望的。神經(jīng)毒素通常在一段時間內(nèi)顯示它們的生物學(xué)效應(yīng)，所述一段時間比所述疾病或狀況的有效治療實(shí)際需要的時間長。然而，在所述醫(yī)學(xué)狀況或疾病的治療中延長的肌肉麻痹是有害的或者至少不是優(yōu)選的。然而，只在所希望的時間段內(nèi)顯示它們的生物學(xué)效應(yīng)的神經(jīng)毒素還不能得到。

因此，本發(fā)明的技術(shù)問題可以看作是提供滿足前述需要的手段和方法。通過權(quán)利要求和下文表征的實(shí)施方案解決了該技術(shù)問題。

因此，本發(fā)明涉及編碼神經(jīng)毒素多肽的多核苷酸，所述多肽在受試者中顯示生物學(xué)效應(yīng)減少的持續(xù)時間，其中所述多肽在輕鏈中包含至少一個降解信號。