[發(fā)明專利]復(fù)雜核酸的擴(kuò)增

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201080025156.5
• 申請(qǐng)日: 2010-06-03
• 公開（公告）號(hào): CN102459632B
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: C·科菲哈格;E·菲希
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 恰根有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司31100
• 代理人: 楊帆

1.一種對(duì)樣品中一種或多種待擴(kuò)增的復(fù)雜模板核酸進(jìn)行定量和定性分析的方法，所述方法包括以下步驟：

a)提供反應(yīng)混合物，其包含

-所述待擴(kuò)增的模板核酸；

-指定量的至少一種對(duì)照核酸，其中所述對(duì)照核酸與所述模板核酸具有小于50％的序列相同性，并且其中所述對(duì)照核酸具有至少一個(gè)已知的序列片段；

-用于擴(kuò)增所述模板核酸的引物；

-用于擴(kuò)增所述對(duì)照核酸的引物；

-適于核酸擴(kuò)增的酶和試劑；

b)對(duì)所述模板核酸和所述對(duì)照核酸進(jìn)行共同擴(kuò)增，其中所述共同擴(kuò)增等溫進(jìn)行，其中所述共同擴(kuò)增包括鏈置換反應(yīng)，并且其中所述模板和對(duì)照核酸通過所述擴(kuò)增基本上完全擴(kuò)增，以允許對(duì)照核酸和模板核酸競(jìng)爭(zhēng)任意所述引物、酶和試劑；

c)對(duì)所述擴(kuò)增的對(duì)照核酸進(jìn)行定量，以評(píng)估所述復(fù)雜模板核酸的起始量或質(zhì)量，其中所述定量在步驟b)的所述共同擴(kuò)增結(jié)束后進(jìn)行，其中，通過使用與所述至少一個(gè)已知序列片段雜交的序列特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增的方式對(duì)所述擴(kuò)增的對(duì)照核酸進(jìn)行定量；和

d)基于步驟c)對(duì)再次擴(kuò)增的對(duì)照核酸進(jìn)行定量的結(jié)果，確定進(jìn)行步驟b)的共同擴(kuò)增之前存在的所述復(fù)雜模板核酸的數(shù)量或質(zhì)量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，另外在所述共同擴(kuò)增結(jié)束后對(duì)核酸總量進(jìn)行定量。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述擴(kuò)增的對(duì)照核酸的數(shù)量和總核酸的數(shù)量與所述復(fù)雜模板核酸的完全擴(kuò)增相關(guān)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1－3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述對(duì)照核酸為線性核酸。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述線性對(duì)照核酸包含大于800個(gè)核苷酸。

6.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述對(duì)照核酸為環(huán)狀核酸。

7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述一種或多種復(fù)雜模板核酸包含大于10,000個(gè)核苷酸。

8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述一種或多種復(fù)雜模板核酸選自DNA和RNA。

9.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述復(fù)雜模板核酸包含一個(gè)或多個(gè)基因組和/或一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)錄物組和/或一個(gè)或多個(gè)種亞硫酸氫鹽組。

10.權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的方法在標(biāo)準(zhǔn)化全基因組和/或全轉(zhuǎn)錄物組和/或全亞硫酸氫鹽組擴(kuò)增中的用途。