[發明專利]用于測定神經毒素多肽的量及其催化活性和蛋白酶解活性的手段和方法

有效

• 申請號: 201080018544.0
• 申請日: 2010-04-23
• 公開（公告）號: CN102414564A
• 公開（公告）日: 2012-04-11
• 發明（設計）人: M·普法伊爾;J·弗里德里希
• 申請（專利權）人: 莫茨制藥有限及兩合公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 黃革生;林柏楠

1.一種在含有已加工好的神經毒素多肽和部分加工和/或未加工的神經毒素多肽的溶液中確定加工好的神經毒素多肽量的方法，包括以下步驟：

a)使所述溶液的第一部分與第一捕獲抗體接觸，從而形成第一抗體復合物，其中所述第一捕獲抗體特異性結合加工好的、部分加工和未加工的神經毒素多肽的輕鏈，其中所述接觸在允許所述抗體結合到所述神經毒素上的條件下進行，

b)使第一抗體復合物與檢測抗體接觸，從而形成第一檢測復合物，其中所述檢測抗體特異性結合步驟a)形成的抗體復合物中的所述加工好的、未加工的和部分加工的神經毒素多肽的重鏈，

c)使所述溶液的第二部分與第二捕獲抗體接觸，從而形成第二抗體復合物，其中所述第二捕獲抗體特異性結合所述部分加工的或未加工的神經毒素多肽的接頭，其中所述接觸在允許所述抗體結合到所述部分加工的或未加工的神經毒素多肽上的條件下進行，

d)使第二抗體復合物與檢測抗體接觸，從而形成第二檢測復合物，

e)測定步驟b)和d)中形成的第一和第二檢測復合物的量。

f)根據步驟e)中測定的第一和第二檢測復合物的量，計算成熟神經毒素多肽的量。

2.一種在含有已加工好的神經毒素多肽和部分加工和/或未加工的神經毒素多肽的溶液中測定加工好的(活性)神經毒素多肽量的方法，包括以下步驟：

a)使所述溶液的第一部分與第一捕獲抗體接觸，從而形成第一抗體復合物，其中所述第一捕獲抗體特異性結合成熟神經毒素多肽、部分加工的和未加工的神經毒素多肽的重鏈，其中所述接觸在允許所述抗體結合到所述成熟神經毒素、部分加工的和未加工的神經毒素多肽上的條件下進行，

b)使第一抗體復合物與檢測抗體接觸，從而形成第一檢測復合物，其中所述檢測抗體特異性結合步驟a)形成的抗體復合物中的所述成熟神經毒素、部分加工的和未加工的神經毒素多肽的輕鏈，

c)使所述溶液的第二部分與第二捕獲抗體接觸，從而形成第二抗體復合物，其中所述第二捕獲抗體特異性結合所述部分加工的和未加工的神經毒素多肽的接頭，其中所述接觸在允許所述抗體結合到所述部分加工的和未加工的神經毒素多肽上的條件下進行，

d)使第二抗體復合物與檢測抗體接觸，從而形成第二檢測復合物，

e)測定步驟b)和d)中形成的第一和第二檢測復合物的量。

f)根據步驟e)中測定的第一和第二檢測復合物的量，計算成熟神經毒素多肽的量。

3.權利要求1或2的方法，其中所述第一捕獲抗體是固定化的。

4.權利要求1至3的任何一項中的方法，其中所述第二捕獲抗體是固定化的。

5.權利要求1至4的任何一項中的方法，其中步驟f)中的計算包括從所測定的第一檢測復合物的量中減去所測定的第二檢測復合物的量。

6.權利要求1至5的任何一項中的方法，其中所述第二捕獲抗體特異地結合具有SEQ?ID?NO：1至16中任何一個所示的氨基酸序列的肽表位。

7.權利要求1至6的任何一項中的方法，其中所述神經毒素多肽選自：

a)SEQ?ID?NO：17至24中任何一個所示的神經毒素多肽；以及

b)具有與a)中的神經毒素多肽的氨基酸序列至少40％相同的氨基酸序列的神經毒素多肽。

8.權利要求1至7的任何一項中的方法，其中所述方法還包括測定神經毒素多肽的結合活性。

9.權利要求8的方法，包括以下步驟：

a)使含有神經毒素多肽的溶液的一部分與標記的肽接觸，從而形成復合物，以及

b)根據標記物，測定步驟a)中形成的所述復合物，其中，復合物的存在、缺乏或其量指示所述溶液中的神經毒素多肽的結合活性。

10.權利要求1至9的任何一項中的方法，其中所述方法還包括測定神經毒素多肽的蛋白酶解活性。