[發(fā)明專利]用于治療癌癥的具鵝膏蕈毒素的靶結(jié)合部分

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201080016648.8
• 申請日: 2010-04-08
• 公開（公告）號(hào): CN102387815A
• 公開（公告）日: 2012-03-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 海因茨·福爾斯蒂奇;F·布雷特林;S·呂特高;G·莫爾登豪爾
• 申請（專利權(quán)）人: 海因茨·福爾斯蒂奇;德國癌癥研究中心
• 主分類號(hào): A61K47/48
• 分類號(hào): A61K47/48;C07K16/28;A61P35/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李進(jìn);劉健

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及腫瘤治療。在一個(gè)方面，本發(fā)明涉及可用于治療癌癥的靶結(jié)合部分和毒素的綴合物。具體而言，毒素為鵝膏蕈毒素(amatoxin)，靶結(jié)合部分(例如抗體)針對腫瘤相關(guān)抗原，例如上皮細(xì)胞黏附分子(epithelial?cell?adhesion?molecule，EpCAM)。在另一方面，本發(fā)明涉及包含這種靶結(jié)合部分毒素綴合物的藥物組合物和這種靶結(jié)合部分毒素綴合物在制備這種藥物組合物中的用途。本發(fā)明的靶結(jié)合部分毒素綴合物和藥物組合物可用于治療癌癥，尤其是腺癌，例如胰腺癌、膽管癌、乳腺癌和結(jié)直腸癌。

發(fā)明背景和技術(shù)狀態(tài)

鵝膏蕈毒素

鵝膏蕈毒素是由8個(gè)氨基酸組成的環(huán)肽。它們可分離自毒鵝膏(Amanita?phalloides)蘑菇，或通過合成從結(jié)構(gòu)單元制備。鵝膏蕈毒素特異性抑制哺乳動(dòng)物細(xì)胞的DNA依賴的RNA聚合酶II，因此亦抑制受影響細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄及蛋白質(zhì)生物合成。在細(xì)胞中抑制轉(zhuǎn)錄引起生長和增殖停止。盡管不是共價(jià)結(jié)合，但鵝膏蕈堿(amanitin)和RNA-聚合酶II之間的復(fù)合物非常緊密(K_D＝3nM)。鵝膏蕈堿與酶解離是非常緩慢的過程，這使得受影響的細(xì)胞不可能恢復(fù)。當(dāng)轉(zhuǎn)錄抑制持續(xù)時(shí)間過長時(shí)，細(xì)胞將經(jīng)歷程序性細(xì)胞死亡(細(xì)胞凋亡)。

上皮細(xì)胞黏附分子

上皮細(xì)胞黏附分子(EpCAM，CD326)是人腫瘤上研究得最為透徹的靶抗原之一(Trzpis等，2007；Baeuerle和Gires，2007)。其代表表觀分子量為40kDa的314個(gè)氨基酸的I型膜糖蛋白(Balzar等，1999)。其在大部分腺癌中過表達(dá)(Winter等，2003；Went等，2004)。具體而言，在結(jié)節(jié)陽性乳腺癌、上皮卵巢癌、膽管癌、胰腺癌和鱗狀細(xì)胞頭頸癌中，EpCAM表達(dá)增強(qiáng)。EpCAM表達(dá)增加在乳腺癌和膽囊癌中表示預(yù)后差(Gastl等，2000；Varga等，2004；Spizzo等，2002；Spizzo等，2004)。重要的是，在乳房癌、結(jié)直腸癌和胰腺癌中通過腫瘤起始或癌癥干細(xì)胞來表達(dá)EpCAM(Al-Hajj等，2003；Dalerba等，2007；Li等，2007)。

業(yè)已將EpCAM特異性單克隆抗體作為診斷工具用于檢測癌癥患者中少見的循環(huán)腫瘤細(xì)胞(Allard等，2004；Nagrath等，2007)。目前在臨床研究中調(diào)查幾種工程改造的抗-EpCAM抗體。

鵝膏蕈毒素和抗體的綴合物

本發(fā)明人早先的專利申請EP?1?859?811?A1(2007年11月28日公開)描述了其中β-鵝膏蕈堿與清蛋白或與單克隆抗體HEA125、OKT3和PA-1偶聯(lián)的綴合物。此外，研究了這些綴合物對乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)、伯基特氏淋巴瘤細(xì)胞(Raji)和T-淋巴瘤細(xì)胞(Jurkat)增殖的抑制作用。

構(gòu)成本發(fā)明基礎(chǔ)的技術(shù)問題

現(xiàn)有技術(shù)中需要靶結(jié)合部分毒素綴合物以極低濃度發(fā)揮其對靶細(xì)胞或組織的毒性作用。此外，現(xiàn)有技術(shù)中還需要治療其它疾病類型，尤其是治療其它類型的癌癥，特別是那些對實(shí)際腫瘤治療有治療抗性或反應(yīng)差的癌癥。

本發(fā)明滿足這些和其它的需要。例如，發(fā)明人在構(gòu)成本發(fā)明基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，包含鵝膏蕈毒素和新的嵌合抗體huHEA125的綴合物能夠以比現(xiàn)有技術(shù)所述綴合物低得多的濃度抑制腫瘤細(xì)胞增殖。具體而言，包含鵝膏蕈毒素和嵌合抗體huHEA125的綴合物以在使用現(xiàn)有技術(shù)的綴合物時(shí)所需濃度的約百分之一的濃度發(fā)揮其抑制作用。此外，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，包含鵝膏蕈毒素和EpCAM特異性抗體的綴合物不僅能抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖，而且意想不到地亦能夠抑制胰腺癌細(xì)胞、結(jié)直腸癌細(xì)胞和膽管癌細(xì)胞的增殖。另外，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)選擇綴合物的鵝膏蕈毒素部分中的特定連接點(diǎn)，產(chǎn)生高度有效的靶結(jié)合部分毒素綴合物(尤其抗體毒素綴合物)，其以極低濃度(IC₅₀大約2x10^-12-2x10^-11M)發(fā)揮其對靶細(xì)胞的毒性活性，并對其靶細(xì)胞具有高度特異性。不希望受特定理論的束縛，該后一優(yōu)點(diǎn)可得到解釋，因?yàn)轾Z膏蕈毒素是在靶細(xì)胞內(nèi)而不是在靶細(xì)胞外從靶結(jié)合部分鵝膏蕈毒素綴合物上被有效釋放。