[發明專利]納米顆粒介導的序列特異性核酸酶的投遞

有效

• 申請號: 201080015582.0
• 申請日: 2010-04-07
• 公開（公告）號: CN102369287A
• 公開（公告）日: 2012-03-07
• 發明（設計）人: J.薩繆爾;J.佩托里諾;N.薩姆博朱;S.韋伯;K.姚
• 申請（專利權）人: 陶氏益農公司
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 封新琴

1.一種將序列特異性核酸酶(SSN)導入植物細胞中的方法，該方法包括：

提供具有細胞壁的植物細胞；

用SSN包被納米顆粒；

將所述具有細胞壁的細胞與所述經包被的納米顆粒彼此接觸地放置；并允許所述納米顆粒和所述SSN被攝取入所述包含細胞壁的植物細胞中。

2.依照權利要求1的方法，其中用SSN包被納米顆粒包括經由所述納米顆粒的表面上的非共價吸收來固定化所述SSN。

3.依照權利要求1的方法，其進一步包括將所述SSN吸收到所述納米顆粒中。

4.依照權利要求1的方法，其進一步包括允許所述納米顆粒被攝取入所述包含細胞壁的植物細胞的區室中。

5.依照權利要求4的方法，其進一步包括用細胞穿透肽和或亞細胞區室靶向蛋白包被所述納米顆粒。

6.依照權利要求4的方法，其中所述區室選自下組：細胞溶膠、細胞核、液泡形成體、質體、黃化質體、色質體、白色體、油質體、蛋白質體、造粉體、葉綠體、和雙層膜的腔。

7.依照權利要求1的方法，其中所述包含細胞壁的植物細胞選自下組：煙草、胡蘿卜、玉米、蕓苔、油菜籽、棉花、棕櫚、花生、大豆、稻屬物種(Oryza?sp.)、擬南芥屬物種(Arabidopsis?sp.)、蓖麻屬物種(Ricinus?sp.)、和甘蔗細胞。

8.依照權利要求1的方法，其中所述植物細胞來自選自下組的組織：胚、分生組織、愈傷組織、花粉、葉、花藥、根、根尖、花、種子、莢和莖。

9.依照權利要求1的方法，其中所述納米顆粒選自下組：金納米顆粒、金包被的納米顆粒、多孔納米顆粒、介孔納米顆粒、硅納米顆粒、聚合物納米顆粒、鎢納米顆粒、明膠納米顆粒、納米殼、納米核心、納米球、納米棒、磁性納米顆粒、半導體納米顆粒、量子點、納米基質、樹枝狀聚合物納米基質及其組合。

10.依照權利要求1的方法，其進一步包括衍生化所述納米顆粒的表面。

11.依照權利要求1的方法，其中所述SSN是由具有非序列依賴性核酸酶域的鋅指蛋白組成的鋅指核酸酶。

12.依照權利要求11的方法，其中所述非序列依賴性核酸酶域源自IIS型限制性內切核酸酶FokI。

13.依照權利要求11的方法，其進一步包括選擇具有穩定整合的所述ZFN的細胞。

14.依照權利要求13的方法，其中選定的細胞是可再生細胞。

15.依照權利要求14的方法，其進一步包括自所述可再生細胞再生植物。

16.依照權利要求1的方法，其中所述納米顆粒是多官能化的納米顆粒。